细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒

保存条件 ： 密封干燥保存

保质期 ： 6个月

库存 ： 1000

供应商 ： 钰博生物

• 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒产品简介：
  1. 我们的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)
  提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽
  提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋
  白。
  2. 本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，
  随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提
  试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。
  3. 约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。抽提得到的蛋
  白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。
  4. 膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、
  磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于
  检测蛋白的磷酸化水平。
  5. 本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。
  yle="orphans: 2; text-align: -webkit-auto; widows: 2;" />
• 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒使用说明：
  1. 准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。取适量的膜
  蛋白抽提试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
  2. 准备细胞或组织样品：
  a. 对于细胞
  (1) 收集细胞
  对于贴壁细胞： 培养约2000-5000万细胞， 用PBS洗一遍， 用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA
  但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧， 并用移液器吹打下细胞。 离心收集细胞，
  吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。
  对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备
  用。
  (2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞
  4℃，600g离心5分钟沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留
  液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。
  (3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞
  中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15分钟。
  b. 对于组织：
  取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF
  的膜蛋白抽提试剂A，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。注：如果组织样品比较少，也可
  以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后
  获得的膜蛋白也较少。
  3. 细胞或组织样品的破碎及破碎效果的鉴定： 把细胞悬液或组织样品转移到一适当大小的
  冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆约30-50下。匀浆效果与细胞类型和组织类型相关，不同细胞或组
  织所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。通常可以在匀浆30次后取约2-3微升细胞或组织匀浆
  液滴在盖玻片上并在显微镜下观察，如见细胞核周晕环(A shiny ring around the nuclei)或完
  整的细胞形态，说明细胞仍完整。如果有70-80%的细胞均无核周晕环和完整细胞形态，说明细胞
  已经充分破碎，则进行下一步实验。否则，重新匀浆10-30次直到细胞至少70%已经破碎。同时记
  录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。另外需注意特定的匀浆次数
  和匀浆器也有关，需同时注意记录使用的是哪一个匀浆器。
  注：如果没有适当的玻璃匀浆器，对于培养的细胞也可以采用冻融法来破碎细胞。把步骤2
  中的样品在液氮和室温依次反复冻融两次，然后取少量样品在显微镜下检测细胞破碎的程度。如
  果细胞破碎的程度不足70%，可增加冻融次数，直到细胞破碎的程度大于70%。
  4. 去除细胞核和未破碎的细胞： 4℃，700g离心10分钟，小心收集上清液至一新的离心管
  中。吸取上清时切勿接触沉淀！可以有约30-50微升上清液残留不予吸取，以保证吸取的上清液
  有较高的纯度。
  5. 沉淀细胞膜碎片：4℃，14000g离心30分钟，以沉淀细胞膜碎片。
  6. 收集细胞浆蛋白： 吸取上清即为细胞浆蛋白， 可-70℃保存备用。 吸取上清时可以有30-50
  微升上清残留，以避免接触沉淀导致上清样品被污染。
  7. 抽提膜蛋白：4℃，14000g离心10秒，尽最大努力吸尽上清。可以轻轻触碰到沉淀，甚
  至吸走很少量的沉淀。加入膜蛋白抽提试剂B 200微升(如有必要，也可以加大到300微升)，最高
  速剧烈Vortex 5秒重悬沉淀，冰浴5-10分钟。重复前述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分
  抽提膜蛋白。随后，4℃，14000g离心5分钟，收集上清即为细胞膜蛋白溶液。可-70℃保存备用。
  对于一些有特殊用途的膜蛋白，可自行配制适当的膜蛋白抽提试剂进行膜蛋白抽提。
  细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒注意事项：
  1. 需自备PMSF。 建议在临用前数分钟内加入PMSF使PMSF的最终浓度为1mM。 PMSF(WB0114)
  可以向我公司订购。
  2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. 可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(WB0123/WB0124/ WB0125/ WB0126)测定蛋
  白浓度。不适合用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
  细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒yb-3976R Aldolase C醛缩酶C抗体 浓度1mg/ml
  yb-3977R Aspartate Aminotransferase谷草转氨酶抗体 浓度1mg/ml
  yb-5013R ABCG5三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员5抗体 浓度1mg/ml
  yb-5014R ABCG8三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员8抗体 浓度1mg/ml
  yb-5015R ACADL酰基辅酶A脱氢酶长链抗体 浓度1mg/ml
  yb-4047R ACADM酰基辅酶A脱氢酶中链抗体 浓度1mg/ml
  yb-4048R ACADS酰基辅酶A脱氢酶短链抗体 浓度1mg/ml
  yb-5021R ACOX1过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1抗体 浓度1mg/ml
  yb-5437R phospho-ASK1 (Ser1033)磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体 浓度1mg/ml
  yb-7696R AXUD1转化生长因子β诱导蛋白3抗体（半胱氨酸和丝氨酸富含核蛋白1） 浓度1mg/ml
  yb-2751R Aurora A+B+C有丝分裂激酶A/B/C抗体 浓度1mg/ml
  yb-2752R ATK蛋白酪氨酸激酶ATK抗体 浓度1mg/ml
  yb-5022R ACSL1长链脂肪酸辅酶A连接酶1/2抗体 浓度1mg/ml
  yb-5030R ACOX2过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶2抗体 浓度1mg/ml
  yb-5019R ACAT1胆固醇酰基转移酶1抗体 浓度1mg/ml
  yb-3021R phospho-ALK (Tyr1278 + Tyr1282 + Tyr1283)磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体 浓度1mg/ml
  yb-3006R phospho-arfaptin 2 (Ser260)磷酸化ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体 浓度1mg/ml
  yb-3049R Phospho-Aurora B (Thr232) + Aurora C (Thr198)磷酸化有丝分裂激酶B/C抗体 浓度1mg/ml
  yb-3001R phospho-Acinus (Ser1180)磷酸化腺泡Acinus蛋白抗体 浓度1mg/ml
  yb-3002R phospho-ADRB2 (Ser346)磷酸化肾上腺素能受体β2抗体 浓度1mg/ml
  yb-2731R APSAPS抗体 浓度1mg/ml
  yb-6020R ACVRL1激活素受体样激酶1抗体 浓度1mg/ml
  yb-6018R ACVR1B激活素A受体1B抗体 浓度1mg/ml
  yb-3004R phospho-Androgen Receptor (Ser597)磷酸化雄激素受体抗体 浓度1mg/ml
  yb-3005R phospho-A Raf (Ser214)磷酸化A-Raf抗体 浓度1mg/ml
  yb-6021R ASAH2酰基鞘氨醇脱酰酶2抗体 浓度1mg/ml
  yb-6022R ASAM脂肪细胞特异性粘附分子抗体 浓度1mg/ml
  yb-11392R AAV5 capsid VP2 protein腺相关病毒5抗体 浓度1mg/ml