Coelenterazine h 腔肠素h

保存条件 ： 密封干燥保存

保质期 ： 6个月

英文名 ： Coelenterazine h

库存 ： 1000

供应商 ： 钰博生物

Coelenterazine h 腔肠素h背景描述

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点，1）能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂；虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。

Coelenterazine h 腔肠素h

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物（见附录1，腔肠素及其衍生物的特性）。

产品描述

本品为粉末形式供应的腔肠素h（Coelenterazine h），是海肾荧光素酶（Rluc）和Gaussia荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物，其发光强度比天然腔肠素高10倍以上，适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子，可用于检测活细胞中钙离子浓度。



产品性质

英文别名（English synonym）

2,8-Dibenzyl-6-(p-hydroxyphenyl)-imidazo[1,2a]pyrazin-3-(7H)-one; 2-Deoxycoelenterazine; CLZN-h; h-CTZ

CAS号（CAS NO.）

50909-86-9

分子式（Formula）

C26H21N3O2

分子量（Molecular weight）

407.48 g/mol

熔点（Melting Point）

142 °C ± 2 °C (dec)

UV（in methanol）

l max: 433 nm ± 2 nm

外观（Appearance）

浅黄色至橘色粉末

溶解性（Solubility）

溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO

纯度（Purity）（TLC）

>99%

结构（Structure）


运输和保存方法

冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体下以避免接触空气。

使用方法

1. 腔肠素工作液的配制

腔肠素溶解特性：腔肠素及所有衍生物都溶于乙醇或者甲醇，切忌溶于DMSO。腔肠素的水溶性相当低，一般情况需用酸化的甲醇配制高浓度母液后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作液，现配现用。有文献报道，含有50 mM的2-羟丙基β环糊精的pH 7.0缓冲体系中可溶解配制＞1 mM的水溶液。目前来看，比较稳定的溶剂是丙二醇，商业化或我司提供的即用型腔肠素h（货号：40907ES10）使用的是丙二醇和/或乙醇的混合溶剂，稳定性高，非常适用于体内动物活体成像研究。

腔肠素母液的配制：称取1mg腔肠素h粉末直接溶解于205µl酸化的甲醇溶液（100%甲醇中含有20µl/ml 3M或者6M HCl），配制成12 mM（~5mg/ml,5×）的腔肠素h储存液。-20℃（最好-80℃）分装避光保存，可能会有少量活性的丧失，但可保存4周。若存放在惰性气体中可长期保存。

腔肠素工作液的配制：可直接用脱气蒸馏水（去离子水），PBS或者其他类型生理缓冲液稀释。现配现用。可直接用不含Ca2+/Ma2+的PBS缓冲液将12 mM的储存液稀释到2.5mM（~1 mg/ml）的工作液，4°C避光短暂存放。若是体外实验，需要使用前室温平衡15-20min。



2. 体内动物成像检测

1）动物经麻醉后，视情况决定是否去皮（一般而言，黑色皮毛动物需进行此步操作）；

2）可通过静脉注射和腹腔注射，推荐使用量25-100µl 2.5 mM (~1mg/ml, 1×)工作液，即注射量25-100µg/mouse，【注】：因实验体系不同，最佳使用量需要优化。然后将动物立即放到BLI仪器内成像，以获得峰值信号。

3. 体外生物发光检测

1）使用管光度计室温下定量检测发光情况，每个样品做三个平行；

2）加入10 µM底物10s内立即检测荧光信号，“integration time”为1s。

具体的检测浓度可根据本身实验条件或者参考文献来优化。

Coelenterazine h 腔肠素h注意事项

1）腔肠素h粉末或者储存液最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素h氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Coelenterazine h 腔肠素hyb1602 其他细胞外基质
yb1603 BPF 牛血浆纤维粘连蛋白 Bovine Plasma Fibronectin 1 mg
yb1604 CCCSCK 胶原I-细胞培养表面包被试剂盒 Collage I-Cell Culture Surface Coating Kit 10 mg
yb1605 PLL 多聚赖氨酸 Poly-L-Lysine 1 mg/ml 1 ml
yb1606 PLL 多聚赖氨酸 Poly-L-Lysine 10 mg/ml 1 ml
yb1607 人类胚胎干细胞/诱导多能干细胞
yb1608 STEMium 人胚胎干细胞无血清培养基 Human Pluripotent Stem Cell Growth Medium 500 ml
yb1609 STEMium-XF 无异种人胚胎干细胞生长培养基 Xeno-free Human Pluripotent Stem Cell Growth Medium 500 ml
yb1610 STEMium-ACF 无动物成分的人胚胎干细胞生长培养基 Animal Component-free Human Pluripotent Stem Cell Growth Medium 500 ml
yb1611 StemDS 人胚胎干细胞分离液 StemDS. Human Embryonic Stem Cell Dissociation Solution 100 ml
yb1612 StemCryo 人胚胎干细胞冻存液 Human Pluripotent Stem Cell Cryopreservation Medium 50ml
yb1613 StemCryo 人胚胎干细胞冻存液 Human Pluripotent Stem Cell Cryopreservation Medium, 5 x 10mL
yb1614 MEF 小鼠胚胎成纤维细胞 Mouse Embryonic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial
yb1615 MEF-mt 小鼠胚胎成纤维细胞--丝裂霉素处理 Mouse Embryonic Fibroblasts-mitomicine treated 5 x 10^5 cells/vial
yb1616 MEF-mt 小鼠胚胎成纤维细胞--CD1小鼠丝裂霉素C处理 Mouse Embryonic Fibroblasts- Mitomycin C treated from CD1 mouse 1 x 10^6 cells/vial
yb1617 MEF-mt 小鼠胚胎成纤维细胞--CF1小鼠丝裂霉素C处理 Mouse Embryonic Fibroblasts from CF1 mouse 1 x 10^6 cells/vial
yb1618 MEF-mt 小鼠胚胎成纤维细胞--CF1小鼠丝裂霉素C处理 Mouse Embryonic Fibroblasts-Mitomycin C treated from CF1 mouse 1 x 10^6 cells/vial
yb1619 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 1 x 10^6 cells/vial
yb1620 MEF-cm 小鼠胚胎成纤维细胞培养基 Mouse Embryonic Fibroblasts-Conditioned Medium 100 ml
yb1621 bFGF-std MEF-cm 碱性成纤维细胞生长因子刺激的小鼠胚胎成纤维细胞条件培养基 bFGF-Stimulated Mouse Embryonic Fibroblasts Conditioned Medium 100ml
yb1622 ULBC plates 干细胞超低结合培养板 Ultra-Low Binding Culture Plate 6-well, 1 plate
yb1623 ULBC plates 超低结合培养板（6孔） Ultra-Low Binding Culture Plate (6-well) "6-well, 4 plates
"
yb1624 ULBC plate 超低结合培养板（24孔） Ultra-Low Binding Culture Plate (24-well) "24-well, 1 plate
"
yb1625 ULBC plates 超低结合培养板（24孔） Ultra-Low Binding Culture Plate (24-well) "24-well, 4 plates
"
yb1626 rhbFGF 重组人碱性成纤维细胞生长因子--碱性 Recombinant Human Fibroblast Growth Factor-basic 10μg
yb1627 rhEGF 重组人表皮生长因子 "Recombinant Human Epidermal Growth Factor
" 100μg
yb1628 rhBMP-2 重组人骨形成蛋白-2 "Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2
" 2μg
yb1629 rhBMP-4 重组人骨形成蛋白-4 "Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-4
" 2μg