产品详情
文献和实验
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保存条件 : 密封干燥保存
保质期 : 6个月
英文名 : 2×Hieff™ Long PCR Master Mix (No Dye)
库存 : 1000
供应商 : 钰博生物
2×Hieff™ Long PCR Master Mix (No Dye)产品描述2×HieffTM Long PCR Master Mix (No Dye)包含Long Taq DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,大大简化实验的操作步骤,提高了高通量操作和实验结果的重现性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’→5’外切酶活性(校对活性)的蛋白组成的混合酶,保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合独特的缓冲体系,Long Taq DNA Polymerase可从人基因组模板中扩增长达15 kb的片段。
Mix中不含有溴酚蓝染料,其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A,可轻松克隆至T载体。
2×Hieff™ Long PCR Master Mix (No Dye)产品组分
组 分
产品编号/规格
10109ES03(1 ml)
10109ES08(5×1 ml)
2×HieffTM Long PCR Master Mix
1ml
5×1ml
超纯水(PCR Grade)
1ml
5×1ml
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中,以ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
功能检测:50 μl体系中,以100 ng人基因组DNA为模板扩增dystrophin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的15 Kb条带。
2×Hieff™ Long PCR Master Mix (No Dye)
注意事项
1. 操作注意事项
由于Long Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性,建议在冰上配制PCR反应体系,再置于PCR仪上进行扩增。这样有利于提高扩增的特异性,减少非特异扩增,得到良好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
1)引物3’端最后一个碱基最好为G或者C;
2)引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;
3)引物3’端尽量避免发夹结构出现;
4)引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5)引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;
6)引物的GC含量控制在40%-60%之间;
7)正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
应用实例
1. 反应体系配制:
ddH2O
Up to 50 μl
2×HieffTM Long PCR Master Mix
25 μl
模板DNA*
optional
引物1(10 μM)
2 μl
引物2(10 μM)
2 μl
*不同模板最佳反应浓度有所不同,下表为50 μl反应体系推荐模板使用量:
人基因组DNA
0.1~1 μg
大肠杆菌基因组DNA
10~100 ng
λDNA
0.5~5 ng
质粒DNA
0.1~10 ng
2. PCR反应条件设置:
目的片段<5 kb
94℃
5 min(预变性)
94℃
30 sec
35个循环
55℃*
30 sec
72℃
30 sec/kb
72℃
7 min(彻底延伸)
*退火温度需要根据引物退火温度调整,一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。
目的片段>5 kb
94℃
1-3 min(预变性)
94℃
10 sec
35个循环
68℃*
30-60 sec/kb
68℃
7 min(彻底延伸)
*对于> 5 kb的片段,推荐使用长引物,Tm值在68-70℃,把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。
2×Hieff™ Long PCR Master Mix (No Dye)
yb1249 MCM 小鼠心肌细胞 Mouse Cardiac Myocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1250 MCF 小鼠心脏成纤维细胞 Mouse Cardiac Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1251 MMSC-bm 小鼠骨髓间充质干细胞 Mouse Mesenchymal Stem Cells-bone marrow 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1252 MEF 小鼠胚胎成纤维细胞 Mouse Embryonic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1253 MEF-mt 小鼠胚胎成纤维细胞--丝裂霉素处理 Mouse Embryonic Fibroblasts-mitomicine treated 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1254 ATCC
yb1255 CD57BL/6小鼠细胞 ATCC
yb1256 MMC 小鼠脑膜细胞 Mouse Meningeal Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1257 MN-r 小鼠脑脊神经元 Mouse Neurons-raphe 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1258 MN-c 小鼠皮质神经元 Mouse Neurons-cortical 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1259 MGC 小鼠颗粒细胞 Mouse Granule Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1260 MN-h 小鼠海马趾神经元 Mouse Neurons-hippocampal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1261 MN-vsc 小鼠腹脊髓神经元 Mouse Neurons-ventral spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1262 MN-dsc] 小鼠背脊髓神经元 Mouse Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1263 MN-vsc 小鼠腹脊髓神经元 Mouse Neurons-ventral spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1264 MSC 小鼠雪旺细胞 Mouse Schwann Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1265 MA 小鼠星形胶质细胞 Mouse Astrocytes 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1266 MA-c 小鼠小脑星形胶质细胞 Mouse Astrocytes-cerebellar 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1267 MA-h 小鼠海马趾星形胶质细胞 Mouse Astrocytes-hippocampal 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1268 MA-sc 小鼠脊髓星形胶质细胞 Mouse Astrocytes-spinal cord 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1269 MM 小鼠小胶质细胞 Mouse Microglia 5 x 10^5 cells/vial ATCC
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