Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶

保存条件 ： 密封干燥保存

保质期 ： 6个月

英文名 ：Hieff™ Hot Start DNA Polymerase

库存 ： 1000

供应商 ： 钰博生物

Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶产品描述

HieffTM Hot Start DNA Polymerase(HS DNA Polymerase)是经过化学修饰的热稳定重组型Taq DNA Polymerase，在室温下活性被完全封闭，只有经过95℃加热后活性才被释放，可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体。与基于抗体的热启动Taq酶相比，化学修饰的HieffTM Hot Start DNA Polymerase活性封闭更彻底，严谨性更高；与现有化学修饰的热启动Taq酶相比，HieffTM Hot Start DNA Polymerase的激活时间只需要5分钟，兼容现有的PCR程序。
HieffTM Hot Start DNA Polymerase的反应缓冲液中的组分、浓度都经过优化，使得引物与模板结合的严谨性提高，从而最大程度的减少非特异扩增和引物二聚体，非常适合于从复杂模板(基因组，cDNA)中扩增低拷贝基因。PCR产物3’端带A，可克隆至T载体。另外，产品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶产品组分

组分

产品编号/规格

10110ES72（250U）


10110ES80（1000U）

10×HS PCR Buffer(with 20 mM MgCl2)

1.25 ml

1.25 ml×4

25 mM MgCl2

1 ml

1 ml×4

dNTP Mix(10 mM each)

200 μl

200 μl×4

HieffTM Hot Start DNA Polymerase(5 U/μl)

50 μl

50 μl×4

5×PCR Enhancer

500 μl

500 μl×4

10×Loading buffer

1.25 ml

1.25 ml×4

活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：PCR体系中加入1.25U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。35个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。

Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

1. 反应体系配制

ddH2O

to 50 μl
10×HS PCR Buffer(with 20 mM MgCl2)

5 μl

25 mM MgCl2a

optional

dNTP Mix(10 mM each)

1 μl

5×PCR Enhancerb

optional

模板DNAc

optional

引物1(10 μM)

2 μl
引物2(10 μM)

2 μl

HieffTM Hot Start DNA Polymerase(5 U/μl)

0.25-0.4 μl

注：a, 对于大多数PCR反应，Mg2+最佳浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2.0 mM的Mg2+，如有需要，可用25 mMMgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+浓度梯度。

b, 推荐仅当模板GC含量＞60%且优化条件也无法正常扩增时使用，可能会降低保真度。

c, 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

人基因组DNA

0.1～1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10～100 ng

λDNA

0.5～5 ng

质粒DNA

0.1～10 ng

1. PCR反应条件设置：
95℃
5 min(预变性)a

95℃

30 sec

35个循环

55℃b

30 sec

72℃

60 sec/kb

72℃

7 min（彻底延伸）

注：a. 如扩增不理想，可适当延长95℃预变性时间，最长可至10 min。

b. 退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。
Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶yb-axbz-189 小鼠淋巴瘤 EL-4 规格25毫升/株.
yb-axbz-190 鳞癌VX-2(兔模型) 规格25毫升/株.
yb-axbz-191 鲑鱼胚胎细胞 CHSE 规格25毫升/株.
yb-axbz-192 鲑鱼胚胎细胞 RTG 规格25毫升/株.
yb-axbz-193 大黄鱼肾细胞 PCK 规格25毫升/株.
yb-axbz-194 鼠腹水单核细胞瘤 J774A.1 规格25毫升/株.
yb-axbz-195 小鼠IL-3依赖性32D细胞 规格25毫升/株.
yb-axbz-196 大黄鱼EPC细胞 EPC 规格25毫升/株.
yb-axbz-197 菜青虫卵巢细胞 Pr-HNV8 规格25毫升/株.
yb-axbz-198 大鼠胰岛素细胞 INS-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-199 小鼠淋巴结血管上皮样细胞 SVEC4-10 规格25毫升/株.
yb-axbz-200 小鼠肉瘤 S37 规格25毫升/株.
yb-axbz-201 小鼠乳腺 EMT6 规格25毫升/株.
yb-axbz-202 C3H小鼠骨肉瘤 LM8 规格25毫升/株.
yb-axbz-203 大鼠骨肉瘤 VMR106 规格25毫升/株.
yb-axbz-204 猴肾C M145 规格25毫升/株.
yb-axbz-205 兔成骨C IF 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-axbz-206 小鼠白血病 L1210 规格25毫升/株.
yb-axbz-207 大鼠皮层神经元细胞 RN-c 规格25毫升/株.
yb-axbz-208 大鼠主动脉平滑肌细胞 RSMC 规格25毫升/株.
yb-axbz-209 小鼠小胶质瘤细胞 Bv-2 规格25毫升/株.
yb-axbz-210 鼠杂交骨髓瘤细胞 K6H6/B5 规格25毫升/株.
yb-axbz-211 大鼠脑膜细胞 RMC 规格25毫升/株.
yb-axbz-212 转基因细胞 3T3/Fas/com 规格25毫升/株.
yb-axbz-213 大鼠肝癌细胞 CRL-1548 规格25毫升/株.
yb-axbz-214 小鼠T淋巴细胞瘤细胞 Cyc-Tag(S49) 规格25毫升/株.
yb-axbz-215 小鼠骨髓细胞 FDC-P1 规格25毫升/株.