pUM19-T Vector TA克隆载体

保存条件 ： 密封干燥保存

保质期 ： 6个月

英文名 ：pUM19-T Vector TA

库存 ： 1000

供应商 ： 钰博生物

pUM19-T Vector TA克隆载体产品描述

pUM19-T载体是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端；HieffTM Pfu DNA Polymerase (10113ES60/76)等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。

pUM19-T Vector TA克隆载体产品组分

组分

产品编号

11902ES03

11902ES08

pUM19-T Vector (50 ng/μl)

20 μl

20 μl×5

500 bp control insert (50 ng/μl)

20 μl

20 μl×5

使用说明

1. 将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。

2. 按下表配置连接反应体系

ddH2O

To 10 μl

10 × Ligase Buffer

1 μl

pUM19-T Vector (50 ng/μl)

1μl (约0.025 pmol)

插入片段*

0.075 pmol～0.25 pmol

T4 DNA Ligase (400 U/μl)

1 μl

注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。

3. 对照反应体系（可选）：

ddH2O

6 μl

10 × Ligase Buffer

1 μl

pUM19-T Vector (50 ng/μl)

1 μl (约0.025 pmol)

500 bp control insert(50 ng/μl)

1 μl (约0.15 pmol)

T4 DNA Ligase (400 U/μl)

1 μl

4. 轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。

5. 转化：

1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。

2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。

3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。

4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

注：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

pUM19-T Vector TA克隆载体运输与保存方法

冰袋运输，-20℃保存。

注意事项

1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。

2) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
pUM19-T Vector TA克隆载体yb-hxbz-410 神经胶质瘤细胞 CRT 规格25毫升/株.
yb-hxbz-411 人胶质母细胞瘤细胞 A172 规格25毫升/株.
yb-hxbz-412 神经胶质瘤细胞 SHG-44 规格25毫升/株.
yb-hxbz-413 人XG恶性胶质瘤细胞 SF-295 规格25毫升/株.
yb-hxbz-414 人恶性胶质母细胞瘤细胞 U87MG 规格25毫升/株.
yb-hxbz-415 人神经上皮瘤细胞 SK-N-MC 规格25毫升/株.
yb-hxbz-416 人神经上皮瘤细胞 SK-N-SH 规格25毫升/株.
yb-hxbz-417 人神经上皮瘤细胞 SH-SY5Y 规格25毫升/株.
yb-hxbz-418 人脑神经胶质瘤细胞（H4） H4 规格25毫升/株.
yb-hxbz-419 人脑胶质瘤细胞系 U373 规格25毫升/株.
yb-hxbz-420 人脑胶质母细胞瘤细胞 SW038-C2 规格25毫升/株.
yb-hxbz-421 转染了tk基因的SW038-C2细胞 SW038-C2-tk 规格25毫升/株.
yb-hxbz-422 人神经胶质瘤细胞 BT-325 规格25毫升/株.
yb-hxbz-423 人神经母细胞瘤细胞 BE(2)C 规格25毫升/株.
yb-hxbz-424 人神经母细胞瘤细胞 BE(2)-M17 规格25毫升/株.
yb-hxbz-425 人XG恶性胶质瘤细胞 SF-295 规格25毫升/株.
yb-hxbz-426 人少突胶质前体细胞-悬浮生长 HOPC-os 规格25毫升/株.
yb-hxbz-427 人跟骨髓瘤细胞 Hp2/o 规格25毫升/株.
yb-hxbz-428 人骨肉瘤细胞 U-2 OS 规格25毫升/株.
yb-hxbz-429 人骨肉瘤细胞 SP20 规格25毫升/株.
yb-hxbz-430 人骨肉瘤细胞 SW1353 规格25毫升/株.
yb-hxbz-431 人成骨肉瘤细胞 Saos-2 规格25毫升/株.
yb-hxbz-432 人骨肉瘤细胞 HOS 规格25毫升/株.
yb-hxbz-433 人骨髓瘤细胞 U266 规格25毫升/株.
yb-hxbz-434 人骨髓瘤细胞 3T3D 规格25毫升/株.
yb-hxbz-435 人成骨肉瘤细胞 MG-63 规格25毫升/株.
yb-hxbz-436 人多发性骨髓瘤细胞 RPMI-8226 规格25毫升/株.
yb-hxbz-437 人横纹肌肉瘤细胞 A-204 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-hxbz-438 胎儿骨髓间充质细胞 FBM 规格25毫升/株.
yb-hxbz-439 人黑色素瘤细胞 HME1 规格25毫升/株.
yb-hxbz-440 人黑色素瘤细胞 HME4 规格25毫升/株.
yb-hxbz-441 人黑色素瘤细胞 HME6 规格25毫升/株.
yb-hxbz-442 人黑色素瘤细胞 HME7 规格25毫升/株.
yb-hxbz-443 人黑色素瘤细胞 HME2 规格25毫升/株.
yb-hxbz-444 人黑色素瘤细胞 HS-6 规格25毫升/株.
yb-hxbz-445 人黑色素瘤细胞 MV3 规格25毫升/株.
yb-hxbz-446 人黑色素瘤细胞 HSC1 规格25毫升/株.