TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasyTM 总RNA提取试剂(同Trizol)
价格: ¥1
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文献和实验
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保存条件 : 密封干燥保存
保质期 : 6个月
英文名 : TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasyTM
库存 : 1000
供应商 : 钰博生物
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasyTM 总RNA提取试剂(同Trizol)产品描述TRIeasyTM Total RNA Extraction Reagent 是一种用于各种动植物、细菌组织/细胞总RNA抽提的试剂,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,保持样品中RNA的完整性,有效抑制RNA的降解。样品在该试剂中能够充分被裂解,在加入氯仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层 (鲜红色下层),RNA分布在上层水相中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可回收得到Total RNA。提取的总RNA纯度高,基本不含蛋白质及基因组DNA, 可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。
此外,在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。
本品操作简单快速,所有操作可以在一小时内完成。且对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasyTM 总RNA提取试剂(同Trizol)
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。产品在4ºC避光保存。
注意事项
1) 需自备氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇 (DEPC水配制)、DEPC和DEPC水。
2) 戴一次性干净手套;在单独的洁净的区域操作;在操作过程中避免讲话,以防实验者汗液、唾液中的RNase的污染。
3) 请尽量使用RNase free的实验器具,包括枪头和离心管。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0. 1% 的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。RNA实验用的器具和试剂应专门使用,不要用于其它实验。DEPC水建议分装后保存。
4) 本产品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本产品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时,应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗;
5) 样品用Total RNA Extraction Reagent 匀浆后,如果不即刻加入氯仿进行下游实验,可先于-70℃下冻存,可保存一个月以上。另保存在75%乙醇中的RNA沉淀,可于4℃保存1周,-20℃保存1年。
6) RNA半衰期比较短,易降解,建议抽提后尽快进行后续实验。
参考用量
表1 每1 ml Total RNA Extraction Reagent 能够充分裂解的最大样本量如下:
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasyTM 总RNA提取试剂(同Trizol)
贴壁细胞
10 cm2培养面积
悬浮动植物细胞或酵母细胞
5 × 106-1 ×107个
细菌
107个
全血
50 μl
动物组织
30-100 mg
植物组织 (多糖和多酚含量不高的)
50-100 mg
*过多的样本量可能会导致裂解不充分,并使产物纯度降低。
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasyTM 总RNA提取试剂(同Trizol)
操作流程
1 样品的处理
1.1 样品的匀浆
A.贴壁细胞
尽量弃去培养液,直接往直径3.5cm的培养板中加入1ml Total RNA Extraction Reagent 覆盖并反复吹打裂解细胞。
注:1)依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定所需的Total RNA Extraction Reagent 量(每10cm2 加1ml)。
2)当加入Total RNA Extraction Reagent量不足时可导致抽提的RNA有DNA污染。
3)贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全裂开,并已释放RNA,继续后续实验即可。
B.悬浮细胞
离心收集细胞,每5 × 106-1 ×107个细胞加入1 ml Total RNA Extraction Reagent,用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
注:在加入Total RNA Extraction Reagent前避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。
C.动/植物组织
取新鲜动植物组织或-70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨,按照表1加入适当量Total RNA Extraction Reagent 混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎,加入适当Total RNA Extraction Reagent量,匀浆仪进行匀浆处理。
注:样品体积一般不要超过Total RNA Extraction Reagent体积的10%。
1.2 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
1.3 (可选)在4℃条件下,12000rpm 离心10min,取上清。
注:如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时,上层是大量油脂应尽量去除,取澄清的匀浆液进行后续实验。
2 总RNA提取
2.1 向上述裂解液中加入1/5体积的氯仿。盖紧离心管盖,剧烈震荡15秒,室温静置2-3min。
2.2 12,000 rpm 4°C 离心10-15分钟。
注:1)离心后混合物可分3层:上层无色水样层,中间层,下层红色有机苯酚氯仿层。RNA无一例外的存在于水样层中。
2)该部分容量大约为所加Total RNA Extraction Reagent 总量的50-60%。如用1 ml Total RNA Extraction Reagent提取,上层水相约为500-600 μl。建议吸取400-500 μl,不要吸的太完全,以防吸到中间层导致基因组污染。
3)有机相和中间层是蛋白和DNA,如有需要,请予以保留,并进行相关纯化实验。
2.3 小心吸取上层水相至一个新的离心管中,加入等体积的异丙醇。颠倒混匀后室温放置10min。(RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。)
2.4 12,000rpm 室温或4°C 离心10分钟。
2.5 小心弃去上清,加入1 ml用DEPC水配制的75%乙醇。充分洗涤管盖和管壁,并轻弹管底,让沉淀悬浮起来。每使用1ml Total RNA Extraction Reagent 用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
2.6 12,000 rpm 室温或4°C 离心3分钟,弃去上清,注意不要丢失RNA沉淀。
注:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
2.7 室温放置2-3min,晾干。加入30-100ul RNase free water(DEPC水),待完全溶解后,取少量检测,其余在-70°C保存。
3 产物检测
A. 完整性检测
1)取1 μl RNA加入适当 10 × DNA loading buffer,混匀。
2)进行1% 琼脂糖凝胶电泳。若能看见清晰的三条带,证明RNA完整性较好。
注意:如果是普通的琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb,18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。
B. 纯度检测
检测260 nm,280 nm OD值,并计算OD 260/OD 280。纯的RNA的比值应在1.8-2.2之间。
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasyTM 总RNA提取试剂(同Trizol)yb-1262 L1210(白血病细胞)
yb-1263 Neuro-2A(脑神经瘤细胞)
yb-1264 PC-12(肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)
yb-1265 HeLa(宫颈癌细胞)
yb-1266 A549 [A-549](肺癌细胞)
yb-1267 MCF7(乳腺癌细胞)
yb-1268 Hep 3B2.1-7(肝癌细胞)
yb-1269 MDA-MB-231(乳腺癌细胞)
yb-1270 Hep G2(肝癌细胞)
yb-1271 HCT 116(结肠癌细胞)
yb-1272 22RV1(前列腺癌细胞)
yb-1273 HT-29(结肠癌细胞)
yb-1274 KG-1(白血病细胞)
yb-1275 LoVo(结肠癌细胞)
yb-1276 THP-1(单核细胞白血病)
yb-1277 SW620(结肠癌细胞)
yb-1278 SK-N-SH(神经母细胞瘤细胞)
yb-1279 SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞)
yb-1280 COLO 205(结肠癌细胞)
yb-1281 T/G HA-VSMC(人主动脉血管平滑肌细胞)
yb-1282 HUVEC(人脐静脉血管内皮细胞)
yb-1283 A10(大鼠主动脉血管平滑肌细胞)
yb-1284 3T3-L1(小鼠脂肪细胞)
yb-1285 A9(皮下结缔组织细胞)
yb-1286 WEHI 22.1(B淋巴细胞 )
yb-1287 NIH/3T3(胚胎成纤维细胞)
yb-1288 MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠原成骨细胞)
yb-1289 L6(大鼠成肌细胞 )
yb-1290 H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞)
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