产品详情
文献和实验
相关推荐
保存条件 : 密封干燥保存
保质期 : 6个月
英文名 :Reactive Oxygen Species Assay Kit/ROS Assay Kit
库存 : 1000
供应商 : 钰博生物
活性氧检测试剂盒/Reactive Oxygen Species Assay Kit/ROS Assay Kit检测原理活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种基于荧光染料DCFH-DA(2,7-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate)的荧光强度变化,定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。
DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜,因此探针很容易被积聚在细胞内。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在最大激发波长480nm,最大发射波长525nm处,使用荧光显微镜,流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号,并根据阳性对照Rosup的荧光信号来分析活性氧的真正水平。
活性氧检测试剂盒/Reactive Oxygen Species Assay Kit/ROS Assay Kit产品组分
编号
组分
规格
保存方法
50101-A
DCFH-DA(10mM)
0.1 mL
-20℃,避光保存
50101-B
活性氧阳性对照(Rosup, 50mg/mL)
1.0 mL
-20℃,避光保存
运输与保存
冰袋运输。-20℃干燥避光保存,有效期一年。
检测步骤
1)装载探针
对于刺激时间较短(通常2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照及感兴趣药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照及感兴趣药物刺激细胞,后装载探针。
原位装载探针:仅适用于贴壁细胞。
(1)按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA,终浓度为10 umol/L。
(2)去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,对于六孔板通常不少于100ul。
(3) 37℃细胞培养箱内孵育20 min。用无血清培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针:适用于贴壁细胞和悬浮细胞。
(1)按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA,终浓度为10 umol/L。
(2)收集好的细胞悬浮于稀释好的DCFH-DA,细胞密度为1.0×106~2.0×107。
(3)37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。
(4)用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照
或自己感兴趣的药物刺激细胞,或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
2)检测
原位装载探针法:激光共聚焦显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
收集细胞后装载探针:用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。
3)参数设置
使用488nm激发波长,525nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似,可以用FITC的参数设置检测DCF。DCF的激发光谱和发射光谱参考下图。
活性氧检测试剂盒/Reactive Oxygen Species Assay Kit/ROS Assay Kit其他事项说明:
(1)阳性对照推荐按照1∶1000的比例使用。如用1μL的阳性对照刺激1mL装载好探针的细胞。通常刺激后20~30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高,可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快,可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
(2)对于某些细胞,如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1∶2000~1∶5000
稀释DCFH-DA,使装载探针时DCFH-DA的浓度为2~5μmol/L。探针装载的时间也可以根据情况在15~60分钟内适当进行调整。
(3)活性氧阳性对照(Rosup)仅仅用于作为阳性对照的样品,并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。
注意事项
1) 探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
2) 探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱见上图。
3) 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
活性氧检测试剂盒/Reactive Oxygen Species Assay Kit/ROS Assay Kityb0001 仓鼠肾成纤维细胞 BHK-21 [C-13]
yb0002 仓鼠肺细胞 CHL
yb0003 仓鼠肺细胞 V79
yb0004 仓鼠卵巢细胞 CHO
yb0005 仓鼠肺细胞 R 1610
yb0006 仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷 CHO/dhFr-
yb0007 仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1
yb0008 仓鼠卵巢细胞 Lec1
yb0009 中国仓鼠卵巢细胞 CTLA4 Ig-24
yb0010 长尾绿猴胚胎细胞 4179
yb0011 长尾绿猴肾细胞 4647
yb0012 大鼠胸大动脉平滑肌细胞 A7r5
yb0013 大鼠成肌细胞 L6
yb0014 大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383
yb0015 大鼠心肌细胞 H9c2(2-1)
yb0016 大鼠肝癌细胞 CBRH-7919
yb0017 大鼠肝癌细胞 RH-35
yb0018 大鼠肝细胞 BRL
yb0019 大鼠肝细胞 BRL 3A
yb0020 大鼠胰腺外分泌细胞 AR42J
yb0021 大鼠胶质瘤细胞 C6
yb0022 大鼠乳腺癌细胞 SHZ-88
yb0023 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化) PC-12
yb0024 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化) PC-12
yb0025 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化) PC-12
yb0026 大鼠肾细胞 NRK
yb0027 大鼠肾细胞 NRK-52E
上海钰博生物科技有限公司
品牌商实名认证
金牌会员
入驻年限:12年