产品详情
文献和实验
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保存条件 ：-20℃保存
保质期 ：有效期2年
英文名 ：rProtein A Agarose Resin 4FF
库存 ：大量
供应商 ：翌圣生物科技(上海)股份有限公司
CAS号 ：点击查看
规格 ：5ml
产品信息
产品描述
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金|黄色葡|萄球菌的细胞壁表面蛋白，与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA和Protein G结合性能不太一样（详见附录1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白A，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，Protein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein A为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
产品性质
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存，2年有效。
需准备试剂
【注】：建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| Protein A Agarose Resin 4FF 蛋白A琼脂糖快速纯化树脂 | 36402ES08 | 5ml | 4℃ | 866.00 |
| Protein A Agarose Resin 4FF 蛋白A琼脂糖快速纯化树脂 | 36402ES25 | 25ml | 4℃ | 2656.00 |
| Protein A Agarose Resin 4FF 蛋白A琼脂糖快速纯化树脂 | 36402ES60 | 100ml | 4℃ | 8856.00 |
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金|黄色葡|萄球菌的细胞壁表面蛋白，与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA和Protein G结合性能不太一样（详见附录1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白A，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，Protein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein A为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
产品性质
| 基质（Matrix） | 高度交联的4%琼脂糖微球 |
| 配体（Ligand） | 重组蛋白A |
| 孔径（Bead size） | 45-165µm |
| 最大流速（Flowmax） | 0.3MPa,3bar |
| 储存缓冲液（Buffer） | 含20%乙醇的1×PBS |
| 载量（Capacity） | ＞40mg human IgG/ml 基质 |
| pH范围（pH range） | 3-12 |
冰袋运输。4℃保存，2年有效。
需准备试剂
【注】：建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】：上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1 Protein A Agarose Resin 4FF的装填
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4）打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。
【注】：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%，当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5）关闭泵，关闭层析柱出口。
6）如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。
7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2 样品纯化
1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）上样：将样品加到平衡好的Protein A Agarose Resin 4FF中，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
3）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）洗脱：使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
3 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
①用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗；
②用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
①用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗；
②用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）Protein A琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
附录2 常见问题与解答
1 Protein A Agarose Resin 4FF的装填
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4）打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。
【注】：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%，当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5）关闭泵，关闭层析柱出口。
6）如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。
7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2 样品纯化
1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）上样：将样品加到平衡好的Protein A Agarose Resin 4FF中，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
3）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）洗脱：使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
3 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
①用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗；
②用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
①用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗；
②用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）Protein A琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
| 免疫球蛋白亚型 | Protein A | Protein G | 免疫球蛋白亚型 | Protein A | Protein G |
| Human IgG | ++++ | ++++ | Mouse IgG | ++++ | ++++ |
| HumanIgG1 | ++++ | ++++ | Mouse IgG1 | + | ++++ |
| Human IgG2 | ++++ | ++++ | Mouse IgG2a | ++++ | ++++ |
| Human IgG3 | + | ++++ | Mouse IgG2b | +++ | +++ |
| Human IgG4 | ++++ | ++++ | Mouse IgG3 | ++ | +++ |
| Human IgM | Use anti-Human IgM | Mouse IgM | Use anti-Mouse IgM | ||
| Human IgE | NR | NR | Chicken IgG (IgY) | NR | NR |
| Human IgA | + | NR | Cow IgG | ++ | ++++ |
| Human IgA1 | + | NR | Goat IgG | + | ++++ |
| Human IgA2 | + | NR | Goat IgG1 | + | ++++ |
| Human IgD | Use anti-Human IgD | Goat IgG2 | ++++ | ++++ | |
| Rat IgG | + | ++ | Goat IgM | NR | NR |
| Rat IgG1 | NR | + | Guinea Pig IgG | ++++ | ++ |
| Rat IgG2a | NR | ++++ | Guinea Pig IgG1 | ++++ | ++ |
| Rat IgG2b | NR | + | Guinea Pig IgG2 | ++++ | ++ |
| Rat IgG3 | + | ++ | Hamster IgG | + | ++ |
| Sheep IgG | + | ++ | Horse IgG | + | ++++ |
| Sheep IgG1 | + | ++ | Rabbit IgG | ++++ | +++ |
| Sheep IgG2 | + | ++ | Rabbit IgM | NR | NR |
| Sheep IgM | NR | NR | Rabbit All isotypes | +++ | ++ |
| Pig IgG | +++ | +++ | Monkey IgG | ++++ | ++++ |
| Cat IgG | ++++ | + | Donkey IgG | ++ | ++++ |
| Dog IgG | ++++ | + | |||
| (+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; | |||||
| 问题 | 可能原因 | 推荐解决方法 |
| 柱子反压过高 | 筛板被堵塞 | 清洗或更换筛板 |
| 填料被堵塞 | 清洗填料 | |
| 裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。 | ||
| 样品纯化过程中曲线不稳 | 样品或 buffer 中有气泡 | 赶出气泡 |
| 样品和buffer进行脱气 | ||
| 洗脱组分中没有目的蛋白 | 样品中抗体浓度太低 | 使用其抗原做配体的介质 |
| 抗体被降解 | 适当的提高洗脱pH | |
| 样品与Protein A结合力低 | 换用Protein G或Protein A/G树脂纯化 | |
| 回收率逐渐减低 | 上样量太多 | 减少上样量 |
| 柱子太脏，载量降低 | 清洗树脂 |
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