BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II

BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II

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品牌: ATCC

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BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II计数:培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II所以要进行细胞计数,计数结果以每毫升细胞数表示,细胞计数的原理和方法怀与血细胞计数相同,血细胞计数器;手工计数细胞,COUI TER计数仪;人工计数。


1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液,10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶(预热20分钟左右)2ml消化,轻轻摇晃,BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II直至肉眼见单层细胞呈块状脱落(或在显微镜下观察细胞之间分离),立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化,轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清,加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中,每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液,正常情况下2-3天就可以长满,期间不用换液。
BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II的传代方法:首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%,不需要长满,就准备传代。倒掉旧的培养基,再用已经高压灭菌过的PBS洗1-2次,我用的是25平方厘米的培养瓶,加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤,再用一次性过滤器过滤除菌,BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II再分装成1ml的小包装,刚好每次用完一个,避免每次反复冻存,会使胰酶的活性下降),加入的量以刚好盖满瓶底为宜。放到倒置显微镜下观察变化,一旦发现细胞开始变园收缩,大约1-3分钟时间,必要时可以吹打帮助细胞分散,就立即加入培养基中和胰酶,如有EDTA最好要离心(800rpm,5min),弃上清夜,BRDU LABEL.AND DETECT.KIT II再加入完全培养基吹匀,再分瓶,一般一瓶可以分2-3瓶。放入5%的CO2培养箱,37度培养24小时后观察。
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xy-1302 OK(负鼠(opossum)肾细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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xy-1309 MG-63(骨肉瘤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
xy-1310 HEC-1-B(子宫内膜腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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xy-1314 MDA-MB-468(乳腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
xy-1315 SK-MES-1(肺鳞癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
xy-1316 MDA-MB-435S(乳腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
xy-1317 NCI-H661(大细胞肺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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xy-1319 NCI-H292(肺癌细胞(淋巴结转移)). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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