Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

保存条件 ： 4℃保存

保质期 ： 6个月

库存 ： 1

供应商 ： 上海信裕

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒产品描述

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit）是用FITC标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

产品组分

组分编号

组分名称

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒产品编号/规格

40302ES20（20T）

40302ES50（50T）

40302ES60（100T）

40302-A

Annexin V-FITC

100 μl

250 μl

250 μl×2

40302-B

PI Staining Solution

100 μl

250 μl

250 μl×2

40302-C

1×Binding Buffer

8 ml

25 ml

25 ml×2

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。本试剂盒中所有组分均在4℃保存，Annexin V-FITC、PI需避光保存。长期不用可将Annexin V-FITC放到-20 ºC保存。

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。

2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3) 实验中如需要固定细胞，比如在检测凋亡的同时检测细胞周期，只能选用Annexin V-FITC，而不能选用Annexin V-EGFP，因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育，并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片，可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。

4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

5) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒操作方法

1 样品染色

1）悬浮细胞：300g，4℃离心5 min收集细胞。

贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。

2）用预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。收集1～5×105细胞。

3）加入100μl 1×Binding Buffer重悬细胞。

4）加入5μl Annexin V-FITC和5μl PI Staining Solution，轻轻混匀。

5）避光、室温反应10 min。

6）加入400μl 1×Binding Buffer，混匀，样品在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

注：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

2 样品分析

A．流式细胞仪分析：

FITC最大激发波长为488 nm，最大发射波长525 nm，FITC的绿色荧光在FL1通道检测；PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm，最大发射波长为615 nm，PI的红色荧光在FL2或FL3通道检测。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10，000 events。典型的实验中，细胞可以分成三个亚群，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色荧光双重染色。

B．荧光显微镜分析：

1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。

注：对于贴壁细胞，可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。

2) 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
xy1450 rHuDES1-3/IGF1 重组人 DES1-3/ 胰岛样生长因子 -1 "Recombinant Human DES1-3/ Insulin-Like Growth factor 1
" 20μg
xy1451 rhIGF-BP3 重组人 IGF-BP3 "Recombinant Human IGF-BP3
" 5μg
xy1452 rhLR3IGF-1 重组人长R3胰岛样生长因子-1 "Recombinant Human Long R3 Insulin-like Growth factor-1
" 20μg
xy1453 rhEGF 重组人表皮生长因子 "Recombinant Human Epidermal Growth Factor
" 100μg
xy1454 rhVEGF165 重组人血管内皮生长因子165 "Recombinant Human VEGF165
" 2μg
xy1455 rhNT-4 重组人神经营养因子-4 "Recombinant Human Neurotrophin-4
" 2μg
xy1456 rhCNTF 重组人睫状神经营养因子 "Recombinant Human Ciliary Neurotrophic Factor
" 5μg
xy1457 rhNRG-1 重组人 NRG-1（表皮生长因子样结构域） "Recombinant Human NRG-1(EGF-like domain)
" 10μg
xy1458 rhErbB3-f 重组人ErbB3片段 "Recombinant Human ErbB3 Fragment
" 5μg
xy1459 rhBTC 重组人乙胞素 "Recombinant Human Betacellulin
" 5μg
xy1460 rhBMP-2 重组人骨形成蛋白-2 "Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2
" 2μg
xy1461 rhBMP-4 重组人骨形成蛋白-4 "Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-4
" 2μg
xy1462 rhBMP-7 重组人骨形成蛋白-7 "Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-7
" 2μg
xy1463 rhOPG-Fc 重组人骨保护素Fc融合蛋白 "Recombinant Human Osteoprotegerin/Fc Chimera
" 10μg
xy1464 rhNOGGIN 重组人NOGGIN蛋白 "Recombinant Human NOGGIN
" 5μg
xy1465 rhGH 重组人生长激素 "Recombinant Human Growth Hormone
" 20μg
xy1466
xy1467
xy1468
xy1469 rmGM-CSF 重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 "Recombinant Murine Granulocyte- Macrophage Colony Stimulating Factor
" 5μg
xy1470 rmTNF-α 重组鼠肿瘤坏死因子-α "Recombinant Murine Tumor Necrosis Factor-alpha
" 5μg
xy1471 rmLIF 重组鼠白血病抑制因子 "Recombinant Mouse Leukemia inhibitory factor
" 5μg
xy1472 rmbFGF 重组鼠成纤维细胞生长因子-碱性 "Recombinant Murine Fibroblast Growth Factor-basic
" 10μg
xy1473 rmFGF-7/KGF 重组鼠成纤维细胞生长因子-7 "Recombinant Mouse Fibroblast Growth Factor-7
" 2μg
xy1474 rmEGF 重组鼠表皮细胞生长因子 "Recombinant Murine Epidermal Growth Factor
" 100μg
xy1475 rmVEGF120 重组鼠血管内皮生长因子120 "Recombinant Murine Vascular Endothelial Growth Factor 120
" 2μg
xy1476 rmVEGF165 重组鼠血管内皮生长因子165 "Recombinant Murine Vascular Endothelial Growth Factor 165
" 2μg
xy1477 rmNOGGIN 重组鼠NOGGIN "Recombinant Murine NOGGIN
" 5μg
xy1478 rmCXCL16 重组鼠CXCL16 "Recombinant Murine CXCL16
" 5μg
xy1479
xy1480
xy1481
xy1482 rrGM-CSF 重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 "Recombinant Rat Granulocyte- Macrophage Colony Stimulating Factor
" 5μg