蛋白AG琼脂糖凝胶FF（ProteinAG Berpharose FF）亲和层析柱介质填料（5ml）

保存条件 ：20%乙醇4-8℃保存

保质期 ：3年

英文名 ：ProteinAG Berpharose FF

库存 ：大量

供应商 ：北京博尔西科技有限公司

CAS号 ：/

规格 ：5ml预装柱

提示：本店全部产品均为科研、实验专用试剂，非药品、非食品、非体外诊断试剂，不可用于动物及人体！


蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF
（Protein AG-Berpharose FF） 蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF 是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。同单独的蛋白A 或蛋白G分离介质相比，具有更宽广的结合范围，同时融合后的r-PAG 降低了对pH值的依赖，允许在pH5-8进行结合。本产品多用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究，及抗体固定及其它相关研究。 1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、25ml、100ml、500ml
3.产品性能

性能	指标
基质	4%琼脂糖微球
配基	蛋白A蛋白G融合蛋白
配基密度	>4mg/ml
载量	≥20mg人IgG /ml
粒径	45-165μm
*大耐压	0.3Mpa
流速	50-300 cm/h
pH稳定范围	3-10
储存缓冲液	20%乙醇
储存温度	4-8℃

4. IgG与蛋白AG结合强度比较

种类	亚类	蛋白A	蛋白G	蛋白A蛋白G融合蛋白
人	IgG1	+++	+++	+++
	IgG2	+++	+++	+++
	IgG3	+	+++	+++
	IgG4	+++	+++	+++
	IgM	+	-	+
	IgD	-	-	-
	IgA	+	-	+
	Fab	+	+	+
兔	IgG	+++	++	+++
山羊	IgG1	+	+++	+++
	IgG2	+++	+++	+++
牛	IgG1	+	+++	+++
	IgG2	+++	+++	+++
小鼠	IgG1	+	+++	++
	IgG2a	+++	+++	+++
	IgG2b	+++	+++	+++
	IgG3	++	+++	+++
	IgM	-	-	-
大鼠	IgG1	+	++	++
	IgG2a	-	+++	+++
	IgG2b	-	+	+
	IgG2c	+++	+++	+++
猪	IgG	+++	++	+++
犬	IgG	+++	+	+++
鸡	IgY	-	-	-
马	IgG（ab）	+	++	+
	IgG（c）	+	++	+

5.纯化流程
以免疫共沉淀（Co-IP）举例：
结合缓冲液：20mM磷酸缓冲液、150mMNaCl、pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，PH3.0
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
（注：所用过柱液体在使用之前建议用至少小于等于0.45μm 滤膜过滤）
（1）样品预处理：细胞、植物、动物组织裂解液样品，最终总蛋白浓度选择在 0.5-1.0ug/ul 范围内为宜，上样前要确保样品溶液拥有合适的离子强度和 pH 值（如：可以用结合缓冲液对样品液进行稀释或透析）；哺乳动物细胞内有多种成分可以和 IgG 发生结合，可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带，可通过加入Normal IgG 和Protein AG-Berpharose FF的方式预处理裂解液样品，以降低非特异性结合。
（2）抗原-抗体复合物制备：将抗体与含有目的蛋白的裂解液混合，室温震荡孵育 30-60min（或4-8 度孵育过夜），形成抗原-抗体复合物（可根据已优化好的抗原抗体结合条件处理）。
（注意：抗体的加入量要依据填料量，抗体的加入量过多会影响到抗原-抗体混合物与填料的结合，故建议抗体加入量为填料载量的80%）
（3）填料平衡：取适量的Protein AG Berpharose FF 加入到 2ml 离心管中，500 r离心1min，弃上清，加入 0.5ml 结合缓冲液，悬浮填料，500 r离心 1min，弃上清，重复两次。
（4）抗原-抗体复合物的吸附：将抗原-抗体复合物加入到平衡好的填料中，均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管， 促使样品和填料充分接触并吸附，约 30min 后，500 r离心 1min，取上清液，留样检测。
（5） 除杂清洗：向上述离心管中加入 0.5ml 的结合缓冲液，悬浮填料，进行清洗，500 r离心 1min，吸弃上清，重复两次。
（6）抗原洗脱：
①非变性洗脱法（洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析）：向离心管中加入 5 倍柱体积的洗脱缓冲液，用移液器吹打 5 次， 混匀，然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管10min 后，500 r离心 1min，吸取上清液，收集洗脱组分，即为目标抗原，收集上清液至新的离心管中，并立即加入十分之一体积的中和缓冲液中和缓冲液调节其pH至中性，用于后期功能分析。
②变性洗脱法（洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测）：向离心管中加入 25ul 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95℃ 加热 5min。然后进行离心，200 r离心 1min，收集上清液，进行 SDS-PAGE 电泳，转膜后进行 Western 分析。


层析柱(预装柱)填料目录：
亲和层析填料(预装柱)
★蛋白A琼脂糖凝胶 FF (Portein A Berpharose FF)
★蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein G Berpharose FF)
★耐碱蛋白A琼脂糖凝胶 FF (rat-Portein A Berpharose FF)
★蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein AG Berpharose FF)
★镍-琼脂糖凝胶FF (Ni- Berpharose FF)
★链霉亲和素琼脂糖凝胶 FF (Streptavidin Berpharose FF)
★Strep-Tactin琼脂糖凝胶 FF (Strep-Tactin Berpharose FF) (StrepII标签蛋白纯化)
★肝素-琼脂糖凝胶 FF (Heparin- Berpharose FF)
★大豆胰蛋白酶抑制剂琼脂糖凝胶 FF (STI- Berpharose FF)
内毒素清除琼脂糖凝胶 (Endotoxin Removal Reagent Berpharose)
GST-琼脂糖凝胶FF (GST Berpharose FF)
钴-琼脂糖凝胶FF (Co- Berpharose FF)

真菌毒素检测免疫亲和柱
黄曲毒素（总量：B族G族、M1、B1）- 免疫亲和柱 (AFT-IAC)
赭曲霉毒素A-免疫亲和柱 (OTA-IAC)
玉米赤霉烯酮-免疫亲和柱 (ZEA-IAC )
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）-免疫亲和柱 (DON-IAC)
T-2毒素-免疫亲和柱 (T-2 toxin-IAC)
伏马毒素-免疫亲和柱 (FB1、FB2、FB3-IAC)

活化填料
NHS活化琼脂糖凝胶 FF (NHS Activated Berpharose FF)
环氧活化琼脂糖凝胶 FF ( Epoxy Activated Berpharose FF)

离子交换层析填料(预装柱)
DEAE-琼脂糖凝胶 FF（DEAE Berpharose FF）
Q-琼脂糖凝胶FF（Q Berpharose FF）
CM-琼脂糖凝胶FF（CM Berpharose FF）
SP-琼脂糖凝胶FF（SP Berpharose FF）
DEAE、Q、CM、SP（预装柱套装4支）

疏水层析填料(预装柱)
苯基-琼脂糖凝胶 FF（Phenyl Berpharose FF）
辛基-琼脂糖凝胶 FF（Octyl Berpharose FF）
丁基-琼脂糖凝胶 FF（Butyl Berpharose FF）
苯基、辛基、丁基（预装柱套装3支）

凝胶过滤层析填料(预装柱)

型号	分离范围
琼葡糖凝胶G10	<700
琼葡糖凝胶 G15(脱盐柱)	100-1500
琼葡糖凝胶 G25 (脱盐柱)	1000-5000
琼葡糖凝胶 G50	1000-30000
琼葡糖凝胶 G75	3000-80000
琼葡糖凝胶 G100	4000-120000
琼葡糖凝胶 G150	5000-300000
琼葡糖凝胶 G200	5000-600000