尿嘧啶糖基化酶

保存条件 ：-20度

保质期 ：2

英文名 ：Uracil-DNA Glycosylase（UNG、UDG）

库存 ：大量

供应商 ：索莱宝

CAS号 ：无

规格 ：100U/500U

尿嘧啶糖基化酶
Uracil-DNA Glycosylase（UNG、UDG）






尿嘧啶糖基化酶
Uracil-DNA Glycosylase（UNG、UDG）

货号	Uracil-DNA Glycosylase
E010100	100U
E010500	500U

产品介绍：
尿嘧啶DNA糖苷酶（UNG）来源于大肠杆菌重组克隆表达，分子量为25kDa，可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶。UNG酶对RNA无活性，主要应用于PCR扩增产物的防污染。其作用原理基于：如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成了含dU碱基的PCR扩增产物，该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解该PCR扩增产物。
规格：1U/μl
储存缓冲液：
20mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，150mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，0.05% Tween20，50%glycerol.
试剂组成：
10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，100mM NaCl，10mM EDTA，1mg/ml BSA.
活性定义：
37℃条件下，1小时降解1µg含dU碱基的单链DNA的酶量为1单位。
保存条件：
每天或每周使用保存于-20℃。长期储存应保存于-70℃保存，并严格避免-70℃保存时反复冻融。
质量控制：
1、SDS-PAGE电泳纯度大于98%；
2、1U UNG在 37℃处理3分钟后，103拷贝以下含U模版应完全降解，不能产生扩增产物。
3、无核酸外切酶和核酸内切酶活性、RNase酶活性；
（1）SDS-PAGE 银染纯度大于98%



（2）UNG 酶消化能力试验
以700bp含dUTP的不同拷贝数基因片段为模板，分别加入含0.5U UNG酶的50μl PCR反应体系，50℃ 消化2min，94℃ 灭活4min后进行PCR扩增反应。
A. Biori UNG

B. Promega UNG


Lane 1：Negative control （no template）；
Lane 2：positive control（no UNG）；
Lane 3~lane 10: 103 to 1010 copies of template
结果表明，我们的UNG酶与Promega UNG酶消化效果相当，均可以有效控制108拷贝以下含有U-DNA的模板的污染。
（3）UNG酶稳定性实验
将UNG酶置于37℃进行7天加速试验。以含dUTP的（106、107、108、109 copies/ml）基因为模板，采用含dUTP的体系进行PCR扩增，50μl反应体系加入0.5U UNG酶，于50℃消化2min，94℃灭活4min；然后进行PCR扩增反应。以Promega公司UNG酶为对照，考察UNG酶对模板的消化效果。



1：negative（No template）；
2～9：postive （104、105、106、107、108、109、1010、1011 copies /ml， No UNG）；
10～14：control Promega UNG（106、107、108、109、1010 copies /ml）；
15～19：Sample UNG（106、107、108、109、1010 copies/ml）。


1～4：Sample UNG（106、107、108、109 copies/ml）；
5～8：Control Promega UNG（106、107、108、109 copies/ml）；
9：negative （No template）；
10～13：Postive （106、107、108、109 copies/ml，No UNG）。



结果表明，我们的UNG酶与Promega UNG酶稳定性相当，均可以在37℃加速7天，仍保持对107copies/ml含dUTP模板的消除能力。
反应条件：

Component	Volumeper Reaction（μl）	Concentration in Master Mix
Template	*	< 1μg/reaction
Primer1	1~5	0.2~1.0μM
Primer 2	1~5	0.2~1.0μM
d NTPs （replace dTTP for 150μM~600μM dUTP）	1	150μM （dATP、dGTP、dCTP）
10×PCR Buffer	5	1×
25mM MgCl2	2~8	1.0~4.0mM
Taq（5U/μl）	0.25	1.25U
UNG（1U/μl）	0.25 （0.1~0.5）	0.25U （0.1~0.5U）
H2O	*	——
Total volume	50μl

1、Incubate the product for 2 min at 50℃；
2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.
注意事项：
1、避免多次冻融，切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有极大影响。
2、尿嘧啶DNA糖基酶可以在PCR反应前清除不慎污染的U-DNA分子。为有效防止污染，一个实验室必须在所有的PCR反应中均使用dUTP作为dNTPs组分之一进行扩增，使所有扩增产物都成为U-DNA。
3、由于不同基因碱基组成不同，因此有些基因对UNG酶残留活性十分敏感，如发现使用UNG 酶影响扩增灵敏度，可以尝试降低UNG酶的用量或对反应体系中dTTP与dUTP的比例进行调整。推荐使用我公司生产的TS-UNG，该酶灭活更加彻底，可以大大简化上述试验过程。



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