产品详情
文献和实验
现货状态 ：2个月内
库存 ：大量
供应商 ：Caliper
保修期 ：1年
规格 ：套
EZ Reader系列产品介绍
1. 功能：针对各种酶类及GPCR类药靶的化学或天然药物的筛选及机理研究。
1） 药靶必需是酶类及GPCR，不适用于离子通道等类药靶；能够使其底物及产物发生电荷变化的酶都适用，但底物需使用多肽或小分子，不能直接用蛋白这样的大家伙；
2） 适用于化学药物或天然产物（海洋、中药、etc.），不适用于生物制药（抗体、基因、siRNAetc.）
3） 考虑通量、成本及技术特性，EZR通常用于：
a) 筛选实验的开发：除了使用厂家现成的试剂盒或是实验方案，客户可以针对自己感兴趣的药靶开发优化筛选实验方案；由于具备实时动力学检测模式，使用EZR可以在更短时间更少花费下评估一系列并最终选择出合适的反应条件（酶、底物、ATP浓度、反应时间等），另外，系统配备有Optimizer软件专门帮助客户发展优化自己的实验方案；
b) 初级筛选（Primary Screening）：就是从大文库中用一些非常快速、高通量且便宜的方法来筛可能的candidate；由于通量、速度及成本的原因，通常EZR不用于这一环节，但对于中药或天然产物筛选可能例外；原因有二，一是这类药物不容易分离到单体，通常就分成若干section直接筛，每个section都有若干种组分；二是EZR先分离后检测且直接检测的技术特点使得其结果可靠性高于其他很多初筛技术，因此即便用于混合成分的筛选，也能够得到有效的结果——日本有药厂把化学药物人为混合起来用EZR筛以提高通量降低成本；
c) 次级筛选（Secondary Screening，有时也叫Hit Confirmation）：就是对初级筛选得到的阳性或者准阳性candidate再做一遍筛选，确认是否确实有意义；因为越往下游每个candidate花的钱越多，所以必需做这样的确认才会再做下去；而EZR通量中等，成本比常规筛选方法贵得有限，但结果可靠性很好——不但可以排除很多初级筛选下来的假阳性结果，还可以准确检测很弱的抑制/促进作用——这类candidate可能会是很好的药物但很容易在早期被作为假阴性忽略掉；
d) 药物作用机理的研究（Mechanism of Action，MOA）：比如激酶抑制剂的话看看是ATP竞争的呢还是底物竞争的，测量IC50，Ki，Km等等；这都是必须做的，由于EZR可以做实时动力学检测，因此，可以以更低的成本更高的效率得到更准确可靠的结果——大大减少了孔与孔之间的误差影响；
e) Kinase Profiling：如果是针对激酶的药物，对特定药靶有很好的效果是远远不够的，如果作用的特异性不好，换言之，对很多激酶都有作用，同样也很难成为好的药物；因此，这类药物研发时一定会评估前面筛选出的好的candidate对其他激酶是否有作用；EZR配套的ProfilingPro Kits，可以用来检测4-12个这样的candidate对24-192+种激酶的作用——如果客户自己研发针对这么多激酶的assay，会是多浩大的一个工程？！
2. 原理及实验流程：基于微流体芯片的Mobility Shift Assay
1）终点法检测（筛选及Profiling用）：
以针对磷酸化激酶的筛选为例，在96或384孔板中构建如下反应体系：
酶＋底物（带荧光标记）＋ATP＋Buffer＋待筛药物，孵育一定时间后终止反应，放到EZR上去检测，EZR的chip的sipper会吸若干nl的反应液到chip上，在液流跟电场作用下，底物跟产物（多一个磷酸化基团，所以带更多负电）在chip的channel中被分离，进而其所带的荧光基团在检测窗口被激发跟检测到，根据底物跟产物峰的荧光信号强度，软件会计算出底物转化成产物的比例；
如果当反应中没有加任何待筛药物（正对照）的时候，这一转化比40％，而加了某待测药物后，转化比变为30％，则说明该成为对该激酶有抑制作用，反之亦然；
不加ATP的反应作为负对照；
2）实时动力学检测（实验方法优化及MOA研究时）：
类似方法构建反应体系，不终止反应，直接放到EZR上去读，每个孔隔若干时间（比如1分钟）取一次样，同样在芯片上分离检测，这样一个孔的反应就可以做出一条动力学曲线了，做一组梯度（比如ATP浓度梯度），则可计算出相应的动力学参数如Km、Vmax等；
3．技术特点：
1）先分离后检测：通过芯片将一个反应的底物及产物分开并分别检测其荧光强度，避免了混合检测时因本底荧光、副反应、不纯的底物等各种可能因素造成的结果偏差，保证实验结果的可靠；
2）直接检测：整个体系中不涉及任何抗体或其他中间体，而是直接检测反应底物及产物，避免引入中间体可能导致的实验结果偏差；
1）＋2）＝高Z’，结果准确可靠且灵敏（即便很弱的抑制或促进也可以准确检出）；
3）实时动力学检测：做优化及MOA时，原本几百个反应才能得到数据EZR上几个或几十个反应就得到了，高效、省钱，且避免了孔与孔之间的误差——结果更准确；
4）ATP不依赖：可以容忍很宽的ATP浓度范围——很多技术不可以；
5）灵活：可以用于多种药靶的筛选，可以用于方法研发、筛选、机理研究及profiling各个药筛环节的工作，可以用完全开放（自己开发实验方案合成底物购买酶等）、半开放（向厂家购买实验方案及标记好的底物）及完全商品化（购买定制筛选试剂盒或ProfilingPro Kit）的方式来使用和执行相关项目；
6）成本可接受：因为其开放性，可以做到很小的体积（4-12ul）且可以做实时动力学检测，又不需要特殊材质的孔板，唯一封闭且相对较贵的东西就是chip了，而chip是可以多次反复使用的（4-Sipper 12000 datapoint，12-Sipper 30000 datapoint，考虑到国内的实验室环境及操作，通常给客户的保证再要打点折），因此，考虑其产出、其他技术成本及CRO的收费标准，EZR的成本是非常有优势的；
了解芯起点基因科技产品请登陆：http://www.xqd-gene.com/
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