新型pUM-T simple快速克隆试剂盒

新型pUM-T simple快速克隆试剂盒【本产品仅供科研使用】

产品说明：

许多高温DNA聚合酶，如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等扩增的PCR产物在3′-末端后都带有一个突出的碱基A，这样的PCR产物可以用3′-末端带有一个突出碱基T的载体方便地进行克隆。目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：第一种，以T4连接酶进行连接，这种方法转化子比较多，阳性率可达到70%-80%，缺点是连接时间较长，一般要过夜连接才能获得较好的连接效率，从而限制了实验的进度。第二种，以拓扑异构酶(TOPO)进行连接，这种方法连接时间很短，在5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中，其缺点是：长片段的连接效率很低，大于1.5Kb的片段用这种方法连接效率很低；克隆转化子少，一般只有十几个到几十个；稳定性比较差，拓扑异构酶对温度很敏感，运输的温度和连接的温度都会影响；连接条件较严格须用PCR仪进行连接反应。为了将上面两种方法的优点综合起来，本公司推出了pUM-T simple载体，该载体实现了10分钟快速连接，同时又可以得到较高的阳性率和较多的转化子。它是在pUC19的基础上进行了改造，经特殊的制作工艺使载体两侧的3′-末端形成未配对的T碱基，从而可以直接与PCR产物进行连接。同时删除了原载体的多克隆位点，从而消除了载体上的酶切位点对插入片段酶切的影响，使酶切更加高效。由于对载体序列进行了优化，使其不会改变lacZ 阅读框架，从而可以进行蓝白斑筛选。可以用M13通用引物对插入的片段进行测序。

产品特点：

◆ 特制的快速连接Buffer，快速克隆基因，连接反应仅需10分钟。

◆ 转化效率和阳性率高，对照片段克隆效率达到95%以上。

◆ T载体具有很好的稳定性。

◆ pUM-T simple载体删除了pUC19的多克隆位点，便于重组子高效酶切。

◆ 含有LacZ基因，适用于蓝白斑筛选。

◆ 含有氨苄青霉素筛选标记。