研选Western及IP细胞裂解液-100ml

保存条件 ： -20℃

规格 ：100ml（促销）

万类生物试剂促销：试剂盒8折优惠，Western及IP细胞裂解液-100ml 试剂盒 原价199元，现价160元。


产品名称：Western及IP细胞裂解液（试用装10ml）

产品概述：
Western及IP细胞裂解液（Cell lysis buffer for Western and Ip）是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。Western及IP细胞裂解液提取的蛋白可应用于PAGE、Western Blot、IP、co-IP等。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH 7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，Na₃VO₄ ，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。

包装信息：


保存条件：
-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。。

注意事项：
1.使用Western及IP细胞裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，此产品可单独向本公司订购如：WLA004 BCA蛋白定量试剂盒。由于本品含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，故不能使用Bradford法进行蛋白定量。
2.建议在使用Western及IP细胞裂解液前，向溶液中加入PMSF或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
3.为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行

该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、Li J; Ye W; Xu W, et al., Activation of autophagy inhibits epithelial to mesenchymal transition process of human lens epithelial cells induced by high glucose conditions. Cell Signal 2020, 75, 109768.
PubMed: 32896607
2、Ou Y; Zhu L; Xu S, et al., Activation of RAW264.7 macrophage by Exopolysaccharide from Aphanothece halaphytica (EPSAH) and the underlying mechanisms. Fundam Clin Pharmacol 2020.
PubMed: 32083746
3、Wu H; Pang P; Liu M D, et al., Upregulated miR20a5p expression promotes proliferation and invasion of head and neck squamous cell carcinoma cells by targeting of TNFRSF21. Oncol Rep 2018, 40 (2), 1138-1146.
PubMed: 29901115
4、Wang Y; Chai Y; He X, et al., Intermittent hypoxia simulating obstructive sleep apnea causes pulmonary inflammation and activates the Nrf2/HO-1 pathway. Exp Ther Med 2017, 14 (4), 3463-3470.
PubMed: 29042934
5、Wang X; Cao P; Liu J, et al., 5-Aminolaevulinic Acid-Based Photodynamic Therapy Restrains Pathological Hyperplasia of Fibroblasts. Med Sci Monit 2017, 23, 46-56.
PubMed: 28052053

操作流程
Ⅰ细胞样品
1. 贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的 PBS漂洗细胞。
（3）加入适量 Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。

表1.贴壁细胞Western及IP细胞裂解液使用量推荐表

细胞培养类型	Western及IP细胞裂解液使用量
100mm	500-1000μl
60mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl/孔
24孔培养板	100-200μl/孔
96孔培养板	50-100μl/孔

（4）将Western及IP细胞裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g 离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×106细胞加入约200-500µl Western及IP细胞裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
Ⅱ组织样品：
1.取适当的Western及IP细胞裂解液，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1 10（g/ml）的比例加入Western及IP细胞裂解液后将组织剪成细小碎片， 用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。