研选RIPA裂解液（强）-100ml

产品概述 ：
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的组织和细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。RIPA裂解液（强）提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。RIPA裂解液的配方有很多种 , 根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液（强）的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1%sodium deoxycholate，0.1%SDS , 以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。

包装信息：

保存条件 ：-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。


该产品被引用文献：
1、Liu H; Gui X; Chen S, et al., Structural Variability of Lipoarabinomannan Modulates Innate Immune Responses within Infected Alveolar Epithelial Cells. Cells 2022, 11 (3).
PubMed: 35159170
2、Xu Q Y; Zhang Q B; Zhou Y, et al., Preventive effect and possible mechanisms of ultrashort wave diathermy on myogenic contracture in a rabbit model. Sci Prog 2021, 104 (4), 368504211054992.
PubMed: 34825614
3、Wang L; Zhang J; Shan G, et al., Establishment of a Lung Cancer Discriminative Model Based on an Optimized Support Vector Machine Algorithm and Study of Key Targets of Wogonin in Lung Cancer. Front Pharmacol 2021,12, 728937.
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4、Zhang T; Jiang M; Yin X, et al., The role of autophagy in the process of osseointegration around titanium implants with micro-nano topography promoted by osteoimmunity. Sci Rep 2021, 11 (1), 18418.
PubMed: 34531513
5、Wang T; Wang P; Ge W, et al., The probiotic Companilactobacillus crustorum MN047 alleviates colitis-associated tumorigenesis via modulating the intestinal microenvironment. Food Funct 2021, 12 (22), 11331-11342.
PubMed: 34668003

注意事项：
1.使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，此产品可单独向本公司订购如：WLA004 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能使用Bradford法进行蛋白定量。
2.建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入PMSF或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
3.为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行

操作流程:
Ⅰ细胞样品
1. 贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的PBS漂洗细胞。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。

表1.贴壁细胞RIPA裂解液使用量推荐表

细胞培养类型	RIPA裂解液使用量
100mm	500-1000μl
60mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl/孔
24孔培养板	100-200μl/孔
96孔培养板	50-100μl/孔

（4）将RIPA裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g 离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×106细胞加入约200-500µl RIPA裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
Ⅱ组织样品：
1.取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1 10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片， 用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
4.14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。

注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，该透明胶状物为基因团，属正常现象。