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保存条件 ：-20℃
规格 ：100ml（促销）
万类生物试剂促销：试剂盒8折优惠，RIPA裂解液（中）-100ml 原价199元，现价160元。产品名称：RIPA裂解液（中）
产品概述：RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的组织和细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。RIPA裂解液（中）提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。RIPA裂解液的配方有很多种 , 根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
RIPA裂解液（ 中） 的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate , 0.1%SDS , 以及sodium orthovanadate， sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。
保存条件 ：-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。。
注意事项：
1.使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，此产品可单独向本公司订购如：WLA004 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能使用Bradford法进行蛋白定量。
2.建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入PMSF或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
3.为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行
操作流程:
Ⅰ细胞样品
1. 贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的PBS漂洗细胞。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。
表1.贴壁细胞RIPA裂解液使用量推荐表
（4）将RIPA裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g 离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×106细胞加入约200-500µl RIPA裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
Ⅱ组织样品：
1.取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1 10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片， 用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
4.14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，该透明胶状物为基因团，属正常现象。
保存条件 ：-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。。
注意事项：
1.使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，此产品可单独向本公司订购如：WLA004 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能使用Bradford法进行蛋白定量。
2.建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入PMSF或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。
3.为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行
操作流程:
Ⅰ细胞样品
1. 贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的PBS漂洗细胞。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。
表1.贴壁细胞RIPA裂解液使用量推荐表
| 细胞培养类型 | RIPA裂解液使用量 |
| 100mm | 500-1000μl |
| 60mm | 250-500μl |
| 6孔培养板 | 200-400μl/孔 |
| 24孔培养板 | 100-200μl/孔 |
| 96孔培养板 | 50-100μl/孔 |
（4）将RIPA裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g 离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量RIPA裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×106细胞加入约200-500µl RIPA裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
Ⅱ组织样品：
1.取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1 10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片， 用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
4.14000×g 离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，该透明胶状物为基因团，属正常现象。
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