G蛋白偶联受体119放免药盒说明书

库存 ： 大量

供应商 ： 钰博生物

检测限 ： 见说明书

检测方法 ： 酶联免疫

应用 ： 科研

标记物 ： 见说明书

样本 ： 血清/组织/尿液

G蛋白偶联受体119放免药盒说明书

GPR119（HY-I0028） RIA KIT
G蛋白偶联受体（G Protein-Coupled Receptors， GPCRs）,是一大类膜蛋白受体的统称。GPR119是经人类基因测序分析发现的一种孤儿受体，其基因定位于X染色体，主要表达于胰腺组织中的胰岛β细胞和PP细胞，以及肠道L细胞（分泌GLP-1）和K细胞[分泌葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（GIP）]。G蛋白偶联受体均是膜内在蛋白（Integral membrane protein），每个受体内包含七个α螺旋组成的跨膜结构域，这些结构域将受体分割为膜外N端（N-terminus），膜内C端（C-terminus），3个膜外环（Loop）和3个膜内环。近来研究发现，大多数G蛋白偶联受体具有一个很重要的特性——固有活性，即在无激动剂条件，受体固有的维持激活并维持下游信号传导通路的活性。G蛋白偶联受体固有活性为新药开发提供了新的视点，反相激动剂开发、基因敲除/敲入治疗技术、固有激活受体技术是根据G蛋白偶联受体固有活性进行新药开发的三个重要方面。其中G蛋白偶联受体119为治疗糖尿病的新靶点而被广泛研究。
该药盒主要应用范围：
*行为和情绪的调节的研究
* 自主神经系统的调节的研究
* 免疫系统的调节以及众多生理过程的研究
G蛋白偶联受体119放免药盒说明书试剂盒组成：
1、GPR119 标记一瓶；
2、GPR119抗体一瓶；
3、GPR119标准品1瓶，浓度为：200.0pg/ml,原液为100为第一标准品，然后用缓冲液倍比稀释,其浓度为：50、25、12.5、6.25 、3.125、1.526pg/ml
4、缓冲液一瓶,
5、分离剂（第二抗体）一瓶。
标本收集：采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml（含150 IU以上）和10%EDTA.Na2 30uL，采血后立即置冰中，30分钟内4℃下2000转/分，离心15分钟取血浆置-20℃待测，可保存3-6个月。
测定方法：（整个试验操作最好在冰浴中进行，否则容易失活）
GPR119 RIA 操作程序（单位：ul）
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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缓 冲 液 —— 300 200 —— ——
标 准 品 —— —— —— 200 ——
样 品 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
¹²⁵I- GPR119 100 100 100 100 100
———————————————————————————— 充分混匀，2～8℃温育20—24小时
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免疫沉淀剂 —— 500 500 500 500
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混匀，室温放置30分钟后，3500 转/分 离心15分钟，去上清，测沉淀cpm值。
G蛋白偶联受体119放免药盒说明书结果计算：
以N/T、B/T计算NSB，S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测物结合百分率，在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
注意事项：
本月药盒抗体每瓶用 10 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 10.0 ml缓冲液稀释
本月标准品每瓶用 3.0 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月，分离剂在使用前充分混匀（不可冰冻）
测定前，血浆标本推荐过C18拄。
附：血浆标本过柱步骤：
1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A )，在4℃下3500转/分 离心20分钟，取上清。
2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA，即为缓冲液B，将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平衡，接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18，速度为1ml/3分钟，并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中，-42℃ 冷冻干燥 ，备用。
7、取干燥后的西林瓶用500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解，并在振荡器上振荡3分钟。实验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种试剂（或材料）。
正常参考值：8.5±3.5pg/ml(n=30)
本月药盒参考数据：
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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