血管活性肠肽放免药盒操作说明书

血管活性肠肽放免药盒操作说明书

VIP（HY-10162）RIA KIT

血管活性肠肽（Vasoactive Intestinal Peptide VIP）是一种脑肠肽，广泛分布于中枢神经系统和消化道，具有多种功能。本药盒适用于血浆提取物，组织提取物及脑脊液内的VIP测定。请认真阅读本说明书，并严格实行。

试剂组成及配制：凡冻干品均保存于-20℃，溶解后避免反复冻融。

1． 鱼精蛋白1瓶，-20℃保存。

2． 缓冲液1瓶，4℃保存。用前在鱼精蛋白瓶中加入1ml蒸馏水溶解，再加1ml缓冲液,此时鱼精蛋白瓶中应呈现白色雾状。如不出现，说明鱼精蛋白已失效,此点十分重要，然后将鱼精蛋白加入缓冲液中。

3． VIP标准(1024pg)2瓶,保存于-20℃（1瓶用于标准曲线，一瓶用于回收试验）， 用前加 2 ml缓冲液，然后做倍比稀释。

4． ¹²⁵I-VIP 2 瓶， 用前加 ml缓冲液/瓶稀释。

5． VIP抗体 2瓶，用前加 ml缓冲液/瓶稀释。

6． 免疫沉淀剂 （第二抗体）1瓶。保存于4℃。

7． 无激素人血浆：1瓶.-20℃保存。

8． 抑肽酶、EDTA.Na2、生理盐水，自备。

9． 牛血清白蛋白（BSA）：0.5g.. -20℃保存。

血管活性肠肽放免药盒操作说明书样品收集：

抽取患者晨空腹静脉血2ml ，置于冰壶预冷的试管内，每个试管含10% EDTA.Na2

30ul和抑肽酶1000 KIU。低温离心1500转/分×15分钟，分离血浆，1ml/管，-20℃保存备测（可贮存二个月）。

血浆样本提取：

1． 取出冻存的血浆管，置于自来水浴中复融。

2． 缓慢加入4℃预冷的丙酮2ml混匀。低温离心（1500转×15分）。将上清液倒

入西林瓶中。提取管不要用塑料瓶（管）！！！否则丙酮溶解塑料瓶（管）。将盛有上清液的各管置于凉风下（空调或风扇）将丙酮吹掉后剩余液体用冷冻抽干机抽干。

组织的提取：

取适宜大小的组织块，立即称重后于1ml 100℃的生理盐水中煮沸3分钟，加1N冰醋酸0.5ml于匀浆器中匀浆提取，再用1N的NaOH 0.5ml中和，离心3000转/分，30分钟（最好是低温离心）。取上清液贮存于-20℃以下待测（样本可保留2 ― 6个月）。

回收试验：

1． 取VIP标准一瓶，用缓冲液2 ml溶解，用缓冲液进行倍比稀释，其浓度为512-64pg/0.1ml。

2． 用无激素人血浆配制标准回收管，每管1ml，各加VIP 64，128及256pg/0.1ml。

3． 按血浆标本提取法（1-2）将标准回收管进行提取。

放射免疫分析：在（冰）水浴中进行，10℃以下。

1．于吹干的各标准回收管及标本管内各加入0.01N HCL 167ul，旋转混合使之溶

解。加入生理盐水（含 0.5%牛血清白蛋白）0.5ml，再旋转混合（适用于血浆

样本测量）。

2、VIP标准配制：取VIP标准一瓶，加缓冲液2ml，然后倍比稀释，使其浓度为512、256、128、64、32、16、8、4pg/ml，共8管。

血管活性肠肽放免药盒操作说明书操作步骤：本实验用非平衡法加样。

VIP RIA 加液程序 （单位：ul ）

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试 剂 T NSB S₀ S₁~S₈ 回收管 样本管

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标本提取液 —— —— —— —— —— 300

回收管提取液 —— —— —— —— 300 ——

缓 冲 液 —— 400 300 200 —— ——

标 准 品 —— —— —— 100 —— ——

抗 体 —— —— 100 100 100 100

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充分混匀，4℃ 放置48小时

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¹²⁵I- VIP 100 100 100 100 100 100

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摇匀4℃ 放置48小时

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沉 淀 剂 —— 600 600 600 600 600

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混匀，室温放置20分钟，3500转/分4~10℃离心15 分钟，弃上清，测定沉淀cpm数。

结果计算：

以N/T、B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值，或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。以各标准管B/B₀%与各标准管浓度的对数绘制曲线图，在图上查出各标本及回收管含量。

回收管含量实测值×2.22

回收率= ———————————— × 100%

回收时加入的VIP含量

血浆样本VIP含量（pg/ml）=实测含量×2.22÷回收率。其中2.22为容积校正系数。

血浆样本VIP正常参考值：20.3±18.3pg/ml(X±SD).如有条件，建立本实验室正常值

本月药盒参考数据：

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T NSB S₀ S₁ S₂ S₃ S₄ S₅ S₆ S₇ S₈

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CPM

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N/T% B₀/T% B/ B₀ %

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