原代细胞分离和培养

规格 ：具体报价根据实验设计和样本量

技术简介

1)技术原理:

原代培养是指从机体取下细胞、组织或器官后，在一定的体外环境条件下立即进行培养。较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质。可用于模拟体内环境的体外实验。

2）实验步骤：

1．取材(以胚胎小鼠为例)：将孕鼠拉颈椎处死，投入75%酒精浸泡数秒消毒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织，打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的消毒器械。最后取出双角子宫置于无菌平皿内。

2．用Hanks液洗涤3次，剪开子宫取出胚胎。除去子宫、血液和筋膜等组织。

3．用弯头剪把胚胎尽量剪碎，每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行，即消化法和组织块培养法。

4．若使用消化法，则将组织块放人三角烧瓶内加入10—30mL0．125%胰蛋白酶，37℃磁力搅拌消化20多min。然后加人少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，800r/min离心5－10min收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶中培养。原代培养 原代培养

5．若进行组织块培养，则不做步骤4，加入几滴血清于组织块中，再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开，注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2－3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来，从边角加入4－5mL培养基，使细胞接触到培养基，放培养箱内继续进行培养。