库存 :大量
英文名 :DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment
货号#
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规格
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价格
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库存
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#M0210L
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1,000 units
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2,549.00 元
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有
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#M0210M
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1,000 units
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2,549.00 元
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有
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#M0210S
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200 units
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569.00 元
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有
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#M0210V
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100 units
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289.00 元
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有
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概述:
DNA聚合酶I大片段(Klenow片段)是E. coli DNA聚合酶I的蛋白水解产物,具有DNA聚合酶活性和3´→5核酸´外切酶活性,但缺失了5´→3´核酸外切酶活性。Klenow既保留了聚合酶的高保真性,又不会降解5´末端DNA。
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来源:
来源:来源于重组融合的E. coli polA基因,应用基因重组技术,将麦芽糖结合蛋白(MBP)基因取代了E. coli polA的5´→3´核酸酶外切结构域,表达的融合蛋白经切割并分离纯化去除MBP,获得Klenow片段,其氨基和羧基末端与常规方法制备的klenow片段相同。
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反应条件:
1X NEBuffer 2 [50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)]。加入dNTPs (不随酶提供)。 当添加dNTPs后,Klenow片段在四种NEBuffer和T4 DNA连接酶反应缓冲液中都有活性。
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质量保证:
1 单位指 37 ℃条件下,30 分钟内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
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单位定义:
1单位指在37°C条件下,30分钟内能使10 nmol 的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
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活性检测条件:
1X NEBuffer 2中加入33 μM dNTPs,包括[3H]-dTTP和70 μg/ml的变性鲑鱼精DNA。
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浓度:
5,000和 50,000 units/ml。
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贮存条件:
25 mM Tris-HCl (pH 7.4),0.1 mM EDTA, 1 mM DTT和50%甘油,贮存于-20°C。
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热失活:
75°C 20分钟。
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使用注意事项:
由于该酶具有3´→5´核酸外切酶活性,升高反应温度、加入过量的酶、未加入dNTP或反应时间过长均会导致DNA末端碱基被切除形成凹陷。
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