库存 ：大量
英文名 ：Bst DNA Polymerase，Large Fragment
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货号#
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规格
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价格
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库存
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#M0330S
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200 units
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569.00 元
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无
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#M0330L
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1,000 units
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2,549.00 元
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无
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#M0330V
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100 uints
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289.00 元
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无
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♦ 随机引物法标记
♦ 合成 cDNA 第二链
♦ 单个 dA 的加尾
♦ 链置换的 DNA 合成（2）
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概述
Bsu DNA 聚合酶大片段保留了Bacillus subtilis DNA 聚合酶 I 的 5' →3' 聚合酶活性（1），但是缺失了 5' →3' 外切酶结构域。大片段缺乏 3' →5' 外切酶活性。
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来源
重组的E. coli菌株，携带有Bacillus subtilis DNA聚合酶 I 基因（起始于第 297 个密码子，因而缺失了5' →3' 外切酶结构域）和麦芽糖结合蛋白（MBP）基因，两个基因融合表达，提纯融合蛋白后，在体外切除 MBP 部分。剩下的 DNA 聚合酶经纯化后不含 MBP。
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反应缓冲液
1X NEBuffer 2 [50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT （pH 7.9 @ 25 ℃）]。加入 33 μM dNTPs（不随酶提供）。
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单位定义
1 单位指 37 ℃条件下，30 分钟内使 10 nmol的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
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活性检测条件
1X NEBuffer 2 中加入 33 μM dNTP（包括 [3H]-dTTP）和 70 μg/ml 的变性鲑鱼精 DNA。37 ℃温育。
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浓度
5,000 units/ml。
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贮存条件
25 mM Tris-HCl（pH 7.4），50 mM NaCl，0.1mM EDTA，1mM DTT 和 50% 甘油。
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热失活
75 ℃ 20 分钟。
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使用注意事项
由于缺乏 3' →5' 外切酶活性，BsuDNA 聚合酶大片段不能切除 3' 未配对的突出末端，因而不适用于平滑末端。
添加 dNTP 后，Bsu DNA 聚合酶大片段在所有的 NEB限制性内切酶反应混合液中均有活性。
25 ℃时 Bsu DNA 聚合酶大片段保留 50% 的活性，是同温度下 Klenow 片段（3' →5' exo–）的两倍。
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参考文献
(1) Okazaki, T. et al. (1964) J. Biol. Chem. 239, 259–268.
(2) Piepenburg, O. et al. (2006) PLOS Biology, 4, 1115–1121.
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