库存 :大量
英文名 :(λ-PPase) Lambda Protein Phosphatase (λ-PPase)
货号#
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规格
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价格
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库存
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#P0753L
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100,000 units
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5,299.00 元
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有
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#P0753S
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20,000 units
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1,329.00 元
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有
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概述
Lambda 蛋白磷酸酶(Lambda PP)是一种 Mn2+依赖型蛋白磷酸酶,对磷酸化的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基有活性。其由 221 个氨基酸组成,由Lambda 噬菌体上开放阅读框 ORF221 编码(1,2)。
Lambda PP 也可作用于磷酸化的组氨酸残基(2)。
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来源
重组E. coli 菌株,携带有 λ 噬菌体的 ORF221 开放阅读框,受 T7 表达系统调控。(由Dr.D.Barford惠赠) (2)。
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反应条件
1X 蛋白金属磷酸酶(PMP)反应缓冲液 [50 mMHEPES(pH 7.5 @ 25 ℃),100 mM NaCl,2 mM DTT和 0.01% Brij 35]。加入 1 mM MnCl2,30 ℃温育。
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随酶提供的试剂
10X 蛋白金属磷酸酶(PMP)反应缓冲液 10X MnCl2(10 mM)
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比活性
~592,600 units/mg。
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分子量
25 kDa。
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品质保证
Lambda PP 无蛋白酶污染。
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单位定义
1 单位指在 50 μl 的反应体系中,30 ℃条件下 1 分钟内水解 1 nmol 的对硝基苯酚磷酸盐(50 mM,NEB #P0757)所需的酶量。
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浓度
400,000 units/ml。
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贮存条件
100 mM NaCl,50 mM HEPES(pH 7.5 @25 ℃),0.1 mM MnCl2,0.1 mM EGTA,2 mM DTT,0.01% Brij 35 和 50% 甘油。保存于 -70 ℃。
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热失活
在有 50 mM Na2EDTA 存在的条件下,65 ℃,1 小时。
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使用注意
建议用 Lambda PP 对蛋白进行去磷酸化的初始反应条件为:
在 50 μl 反应体系中,100 units 的 Lambda PP 在 30 分钟内可以除去 10 μM(就磷酸浓度而言)的髓磷脂碱蛋白(phospho-MyBP,18.5 KDa)中约 100%的磷酸基团(0.5 nmol)。
用 cAMP 依赖型蛋白激酶专一性地磷酸化 MyBP的丝氨酸/苏氨酸残基,磷酸化的 MyBP 作为底物,来估算 Lambda PP 的蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(PSP)活性。对于蛋白酪氨酸激酶(PTP)活性的测定,所用底物为经 Abl 酪氨酸蛋白激酶专一性地对酪氨酸残基进行磷酸化的 MyBP。
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