T4 RNA连接酶2 (双链RNA连接酶) T4 RNA Ligase 2 (dsRNA Ligase)

货号#

规格

价格

库存

#M0239L

750 units

3,269.00 元

有

#M0239S

150 units

819.00 元

有

腺苷 5'–三磷酸（ATP）
#P0756S 1 ml ¥319
#P0756L 5 ml ¥1,269

♦ 连接粘性末端接头
♦ 连接双链 RNA 中的切刻最佳用酶
♦ 可用于 DNA/RNA 杂交链中，RNA3' 羟基与 DNA 5' 磷酸基的连接
♦ 重组酶
♦ 随酶提供 10X 反应缓冲液

概述

T4 RNA连接酶2，也被称为T4 Rnl-2 (gp24.1)，同时具有RNA链分子间和分子内连接活性(1-3)。与T4 RNA连接酶1 (NEB #M0204) 不同的是，T4 RNA连接酶2对双链RNA切刻的连接活性要明显高于对单链RNA的末端连接。该酶连接时需要相邻的3´羟基与5´磷酸基。同时该酶也可用于连接双链结构中RNA 3´ 羟基和DNA 5´磷酸基的切刻(4)。

来源

携带T4 RNA连接酶2基因的重组E.coli菌株。

反应条件

1X T4 RNA Ligase 2反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C), 2 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 400 μM ATP]，37°C温育。

质保声明

经检测每批产品均无单链和双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶以及磷酸酶的污染。

单位定义

1单位指20 μl反应体系中，37°C条件下，30分钟内完全连接0.4 μg的23-mer和17-mer RNA等分子混合物所需的酶量。

退火后底物将形成如下的双链RNA分子，随后用此酶进行连接。

活性检测条件

1X T4 RNA Ligase 2反应缓冲液，0.4 μg的23-mer和17-mer RNA等分子混合物。37°C温育30分钟，连接产物在15%的聚丙稀酰胺凝胶电泳上检测。

浓度

10,000 units/ml。

贮存条件

10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM KCl, 35 mM (NH₄)₂SO₄, 0.1 mM EDTA, 0.1 mM DTTl和50%甘油。–20°C贮存。

参考文献

(1) Ho, C.K. and Shuman, S. (2002) Proc. Natl.Acad.Sci. USA, 99, 12709–12714.
(2) Ho, C.K. et al. (2004) Structure, 12, 327–339.
(3) Nandakumar, J. et al. (2004) J. Biol. Chem., 279, 31337–31347.
(4) Nandakuman, R. and Shuman, S. (2004) Mol. Cell., 16, 211–221.