蛋白质相对定量与绝对定量itraq技术价格

服务名称：itraq实验技术服务

提供商：辉骏生物

iTRAQ实验技术原理-辉骏生物
iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术，即蛋白质相对定量与绝对定量技术，是近年来开发一种多肽体外标记技术。该技术采用8种同位素编码的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，再进行串联质谱分析，可同时比较8种（或8种以下）不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。iTRAQ的8种同位素标记试剂由8种相对分子质量分别为113、114、115、116、117、118、119和121的报告基团(reporter group)，相对分子质量分别为32、31、30、29 、28、27、26和24 的质量平衡基团(balance group)以及一个相同的肽反应标记试剂基团(peptide reactive group)组成。不同的报告基团分别与相应的平衡基团相配后，相对分子质量均为145，即等量异位标签(isobaric tag)。其原理是首先将蛋白质裂解为肽段，然后用iTRAQ试剂进行差异标记。由于iTRAQ试剂是等量的，即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测，分子量完全相同，用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursor ion)进行碰撞诱导解离，产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中，报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂，质量平衡基团丢失，产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团，不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时，多肽内的酰胺键断裂，形成一系列b 离子和y 离子，得到离子片段的质量数，通过数据库查询和比较，可以鉴定出相应的蛋白质前体。

iTRAQ实验流程结构图-辉骏生物

图1：iTRAQ试剂包括三部分：报告部分、肽反应部分、平衡部分。1、报告部分有八种：113-121（无120），因此iTRAQ试剂可同时标记8组样品。2、肽反应部分：能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接而标记上肽段。3、平衡部分：保证被标记的同一肽段的质荷比相同。

与传统的双向电泳定量分析相比，iTRAQ具有以下优点
1、灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白；
2、分离能力强，分析范围广，iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行分离鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白；
3、高通量：同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析；
4、结果可靠：定性与定量分析结果更加可靠；
5、自动化程度高：液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。

iTRAQ技术流程-辉骏生物

iTRAQ技术应用（举例）-辉骏生物
1、用于生物学基础研究：病害、环境污染对生物的影响，物种在不同时期或不同品种在某一特性上表现出的蛋白差异等
2、用于寻找疾病相关的蛋白质标志物
3、用于微生物蛋白组研究，彻底阐明病原微生物的致病机理并寻找全新的药物作用靶点。
4、蛋白质组数据库将成为药物设计的路标
5、追踪胞内信号分子的移位，阐明目标蛋白质在信号转导途径中的位置。

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