汉恒生物开发的悬浮细胞专用腺病毒针对悬浮细胞的细胞膜特性进行了腺病毒的改造，病毒感染体系也进行了相应的优化，极大改善对悬浮细胞的感染能力。对贴壁细胞的感染能力无影响，可以通用。汉恒悬浮细胞专用腺病毒对Jurkat、K562等众多悬浮培养细胞系感染效率接近100%，对血液来源原代细胞，如CD4⁺ T细胞感染效率可达60%以上

腺病毒的特点：
1.感染范围广：腺病毒可适用于普通细胞系的感染，也可用于悬浮细胞、原代细胞等
2.感染效率高：腺病毒的滴度可高达10¹¹PFU/ml，感染效率高，可感染悬浮细胞、原代细胞等
3载体容量大：.腺病毒的载体容量较大，最高可达8kb

悬浮细胞专用腺病毒感染注意事项：

1、悬浮细胞准备：腺病毒建稳转细胞系前，请确保目的细胞状态良好、无支原体污染。腺病毒感染的时候细胞汇合率为40%～60%间为宜。

2、感染细胞最佳MOI的测定：MOI（感染复数）是指每个细胞感染的病毒数。 

注：腺病毒对于不同种类不同来源的细胞，其最适MOI各有差别。对于悬浮细胞，腺病毒MOI一般以30, 100, 300, 1000, 2000的比例递增进行梯度摸索，相比于贴壁细胞，悬浮细胞的腺病毒MOI需求更高，MOI梯度摸索建议用96孔板进行以节省病毒和细胞。

3、MOI对应病毒体积的换算 

感染时细胞数（一般以传代计数细胞数×2计算）×MOI=病毒个数；则加入的病毒体积数=病毒个数/病毒滴度
 

腺病毒感染细胞步骤
注：微信扫码关注汉恒生物公众号，观看汉恒生物-腺病毒细胞感染实验操作教学视频。
1.感染前准备

• 按实验需要将悬浮细胞铺板（比如96孔板）37 ℃ 培养过夜。细胞数以第2天密度约40%～60%间为宜。
• 从冰箱取出悬浮细胞专用腺病毒并在冰上缓腺融化，待完全融化后开始病毒感染实验。

2. 目的细胞的感染
吸去细胞原有培养基，加入新鲜培养基，选定MOI值换算对应的病毒原液体积，并按体积将病毒原液加入细胞中，摇匀。封好口，放入平角离心机后，低速（500g）离心1.5h，然后放入37℃培养箱中继续积感染4小时。

•  37 ℃培养箱中感染完毕后，取出细胞，吸去含病毒的培养液，换上新鲜培养基，继续37℃培养。
• 感染48小时后，荧光显微镜检测GFP/RFP等荧光表达效率。对于部分悬浮细胞，荧光表达较慢，需待96小时后才会有明显荧光

悬浮细胞专用病毒感染实例
 
悬浮细胞专用腺病毒Ads感染小鼠原代CD4⁺ T细胞：
温馨提示：
1.收到汉恒生物腺病毒产品后，请先对腺病毒产品进行分装处理，建议50 μl/管。如3天内使用，则留足够量病毒4 ℃保存，余下腺病毒置于-80 ℃长期保存。
2.腺病毒可以存放于-80 ℃ 6个月以上；但如果腺病毒储存时间超过 6个月，建议在使用前重新测定腺病毒滴度。
3.腺病毒是DNA病毒，相对慢病毒这类RNA病毒稳定得多。反复缓慢冻融腺病毒5-6次对10⁹ PFU/ml滴度以上腺病毒滴度无显著影响。但注意要在冰上融化腺病毒，而不能放在37 ℃。持续多次的冻融仍会降低腺病毒滴度。