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文献和实验
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库存 : 大量
供应商 : 上海信裕
检测方法 : 见说明
大鼠脂蛋白脂酶(LPL)检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理:
LPL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知LPL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将LPL和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中LPL的活性浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48份酶标板 | 1块板(96T) | 半块板(48T) | 即用型 |
塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
标准品:400ng/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按说明书进行稀稀 |
空白对照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
标准品稀释缓冲液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
生物素标记的抗LPL抗体 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
亲和链酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
洗涤缓冲液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按说明书进行稀释 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
终止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
大鼠脂蛋白脂酶(LPL)检测试剂盒操作注意事项
1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
400ng/ml | (6号标准品) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
200ng/ml | (5号标准品) | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
100ng/ml | (4号标准品) | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
50ng/ml | (3号标准品) | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
25ng/ml | (2号标准品) | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
12.5ng/ml | (1号标准品) | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
0ng/ml | (空白对照) | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
大鼠脂蛋白脂酶(LPL)检测试剂盒操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
4.局限性:6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
大鼠脂蛋白脂酶(LPL)检测试剂盒结果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的LPL标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的LPL含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-400ng/ml
4、敏感度: 1.0ng/ml
xyA660Ge 【中文名称】:8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for 8-Hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA908Ge 【中文名称】:褪黑素(MT)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Melatonin (MT) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA478Po 【中文名称】:猪心肌肌钙蛋白I(TNNI3)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA079Ca 【中文名称】:狗白介素6(IL6)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA056Ca 【中文名称】:狗白介素10(IL10)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interleukin 10 (IL10) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA049Ca 【中文名称】:狗干扰素γ(IFNγ)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interferon Gamma (IFNg) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA798Po 【中文名称】:猪低氧诱导因子1α(HIF1α)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA780Bo 【中文名称】:牛乳铁传递蛋白(LTF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Lactoferrin (LTF) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA028Ca 【中文名称】:狗红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA058Po 【中文名称】:猪白介素12B(IL12B)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interleukin 12B (IL12B) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA133Ca 【中文名称】:狗肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Alpha (TNFa) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA045Ca 【中文名称】:狗粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Colony Stimulating Factor 2, Granulocyte Macrophage (GMCSF) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB949Po 【中文名称】:猪转化生长因子β3(TGFβ3)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB735Hu 【中文名称】:人胱天蛋白酶4(CASP4)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Caspase 4 (CASP4) 【灵敏度】:9.375pg/mL
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