染色质免疫共沉淀（ChIP）试剂

英文名 ：Snapshot ChIP Assay

供应商 ：武汉中帜生物

保存条件 ：4度、-20度

染色质免疫共沉淀（ChIP）实验用于体内分析转录因子或者辅因子与相应启动子序列的相互作用，从而证实该转录因子或者辅因子在同一时间如何调控单个基因或多个不同基因表达。经过多方面的改进，Signosis的Snapshot ChIP Assay和Snapshot μChIP Assay能够高效地检测到转录因子或者相关辅因子与目标启动子之间的相互作用。
在基因表达过程中，不仅需要与启动子元件直接结合的转录因子，还需要与这些转录因子相关的其它辅激活因子。相互作用的辅因子整合多个转录因子及通路，形成独特的生物学过程。相对于凝胶迁移实验（EMSA）在体外进行的检测来说，染色质免疫共沉淀（ChIP）实验能在细胞内完成转录因子与启动子序列相互作用分析，研究转录因子及其辅因子在同一时间如何调控单个基因或多个不同基因表达。经过多方面的改进，Signosis的Snapshot ChIP Assay能够高效地检测到转录因子或者相关辅因子与目标启动子之间的相互作用。
A.产品优势：
双交叉结合——可以检测到与目标启动子结合的转录因子以及相关的辅因子；
高重复性——用可控的MNase消化法代替超声破碎完成DNA片段化，实验重复性高；
操作简单——使用Chelex-100处理释放DNA，只需一步，代替繁琐的蛋白酶K消化、柱纯化法；
使用方便——试剂盒中包含实验所需的所有组分，包括交联剂和酶。
B.技术原理：
ChIP实验通常分为四个步骤：（1）蛋白质与DNA交联；（2）染色质片段化；（3）蛋白质沉淀；（4）靶标识别及鉴定。第一步的交联是要保证形成的蛋白质-DNA复合物在后续实验过程中保持结合状态。甲醛是最常用的可直接结合DNA的蛋白的交联剂，比如转录因子和组蛋白等，但由于短间隔臂的原因对于间接结合DNA的辅活化因子和辅阻遏物作用有限。
针对常规ChIP实验的问题，Signosis的ChIP试剂盒做了以下几点突出改进：第一，双交联，除了甲醛以外加入另外一种交联剂，确保能够检测到直接结合DNA的转录因子以及间接结合的辅因子；第二，通过MNase消化将DNA破坏形成500bp以内的单核小体，这一改进大大增强了实验的灵敏度和重复性。染色质片段化以后，交联的蛋白质-DNA复合体由特定的抗体以及ChIP级的蛋白质A/G磁珠进行富集。最后一个改进是使用Chelex-100处理一步释放与蛋白交联的DNA片段，代替繁琐的蛋白酶K消化、柱纯化多步法，大大提高实验效率。
C.原理示意图： D.结果展示： NF-κB p65两步蛋白-DNA交联效果。实验用细胞经过或者未经过TNAα处理60min，分别使用双交联试剂和甲醛进行交联。ChIP实验过程中使用5ug NF-κB p65特异性抗体进行免疫沉淀，最后进行IkB启动子的PCR检测。泳道1：TNAα处理细胞，兔IgG抗体沉淀；泳道2：未处理细胞，分别使用p300及NF-κB p65抗体沉淀；泳道3：TNAα处理细胞，分别使用p300及NF-κB p65抗体沉淀；泳道4：TNAα处理细胞，分别使用p300及NF-κB p65抗体沉淀；1-3样本使用Signosis双交联试剂，泳道4使用甲醛交联。

产品名称	规格	编号
免疫共沉淀（ChIP）试剂	20次反应	7137元