黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒

保质期 ：6个月

库存 ：大量

供应商 ：江苏省苏微微生物研究有限公司

保存条件 ：4度

规格 ：96T

【概要】
黄曲霉毒素是一类真菌（主要是黄曲霉和寄生曲霉）代谢的有毒产物，主要存在于谷物，坚果，棉籽以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素以AFB1、AFB2、AFG1和AFG2这四种毒素为主，黄曲霉毒素总量一般是指这四种毒素的总量。它们是I类致癌物，被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害，是一类毒性很强的致癌物质。因此，必须对其进行及时检测监控，目前主要的检测手段是高效液相色谱法。（HPLC）
本产品是基于免疫竞争法检测原理建立的一种快速定量检测黄曲霉总量的试剂盒。它具有简单、快速，无需特殊仪器设备等优势，既可以用于实验室检测，也可在农场、饲料混合车间等进行实地测定。

【适用范围】
可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素总量。

【试验原理】
本试剂盒采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素抗原，加入样本/黄曲霉毒素总量标准品溶液及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素总量抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素与预包被在微孔板上的黄曲霉毒素B1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素总量抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去，再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素总量的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素总量的含量。

【试剂盒组成】

1. 48孔板×1块
2. 标准液×6瓶：（1ml/瓶）

0ppb,0.05ppb, 0.15ppb,0.45ppb
3. 酶标物1瓶……………………………………………3ml
4. 抗试剂1瓶……………………………………………3ml
5. 显色液1瓶…………………………………………3ml
6. 底物液1瓶…………………………………………3ml
7. 终止液1瓶 ………………………………………6ml
8. 浓缩洗涤液 （20×）1瓶………………………… 20ml
9. 浓缩样品稀释液（2×）1瓶 ……………………40ml

【需要而未提供的设备及试剂】
设备：
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅振荡器
┅┅粉碎机
┅┅离心机
┅┅微量天平：感量0.01g
┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、200ml～1000ml
多道300ml
试剂：
┅┅甲醇
┅┅去离子水
【试剂配制】

1. 样品稀释液：将浓缩样品稀释液用去离子水按1:1体积比进行稀释（1份浓缩样品稀释液+1份去离子水）。
2. 洗涤工作液：将浓缩洗涤液用去离子水按1:19体积比进行稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水）。
3. 样品提取液：将甲醇与去离子水按4：1体积比配制成80%甲醇水。

【样本前处理步骤】

1. 取1.0g样品与10ml样品提取液混合均匀，振荡1min；
2. 4000r/s离心5min；
3. 取100μl上清液，加入400μl样品稀释液进行稀释，充分混匀；
4. 取50μl稀释后液体待测。

【检测步骤】

• 测定前须知：

1. 使用之前将所有试剂和所需板条回温（20～25℃）。

1. 使用之后立即将所有试剂及剩余板条放置2～8℃。
2. ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA操作中的要点。
3. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

二、操作步骤：

1. 将所需试剂及微孔板取出，放置室温（20～25℃）30min以上，液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出所需数量的微孔板，将不用的微孔板与干燥剂一起重新真空密封，放置于2～8℃。不可冷冻。
3. 洗涤工作液在使用前也需回温。
4. 将样本和标准品对应微孔编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

加标准品/样本50ml到对应的微孔中，加入酶标物50ml/孔，抗试剂50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光反应20min。

1. 小心揭开盖板膜，用洗涤工作液充分洗涤，300ml/孔，洗板5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干。
2. 加入底物液50ml/孔，显色液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光反应10min。
3. 加终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设酶标仪于450nm处读取每孔OD值。