T7核酸内切酶I (T7 endonuclease I, T7E1 )

供应商 ：北京唯尚立德生物科技有限公司

T7核酸内切酶I(T7 endonuclease I,T7E1)

货号		规格		价格
#E001S		300 units		500.00元
#E001L		1500 units		2,200.00元
浓度	5,000units/ml	储存	-20℃	反应条件	37℃温育

编号	组成		E001S	E001L
1	T7E1		300U	5×300U
2	10× T7E1 buffer		200μl	5×200μl
3	阳性DNA与引物	Control引物(10μM )	20μl	20μl
4		Control C(10ng/μl )	40μl	40μl
5		Control G(10ng/μl)	40μl	40μl

应用

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■ 基因突变和SNP的检测，可应用于TALEN、CRISPR/CAS9形成的突变体检测

■ 识别错配 DNA，分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA

■ 检测或切割异源二聚体 DNA 和切割 DNA

■ 随机切割线性 DNA 进行 shot-gun 克隆

概述

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T7 核酸内切酶 I 识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割或切刻双链 DNA。该酶切割错配碱基 5′ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。

来源

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重组T7 核酸内切酶I(T7 endonucleaseI,T7E1)

反应条件

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Buffer [50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @?25℃）], 即同1X NEBuffer 2，37℃温育。

质保声明

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T7 核酸内切酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。

单位定义

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1 单位指在50 μl反应体系，37℃，1 小时将1 μg超螺旋十字型结构的pUC（AT）质粒酶切成 90% 以上的线性DNA所需要的酶量。

注意事项

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T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55℃，会导致酶活性降低。

T7E1酶切法检测突变体实验步骤

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1、PCR扩增出带有突变位点(如TALEN or CRISPR/Cas9的target site)DNA片段，长度约500bp，突变位点最好不位于PCR片段中央，这样将切割出两条大小不同的带。

2、突变体DNA与野生型DNA的PCR产物按如下体系进行混合，进行加热变性、退火复性处理。

编号	1	2	3
突变体DNA PCR产物	5μl	2.5μl	0
野生型DNA PCR产物	0	2.5μl	5μl
10X T7E1 Buffer	1.1μl	1.1μl	1.1μl
ddH2O	4.4μl	4.4μl	4.4μl
Total
充分混合后，退火

3、建议退火程序：（PCR仪）

95℃ 5 min

95℃ 2 sec

-0.1℃/cycle, 200 times

75℃ 1 sec

4、上述反应体系退火后分别加入0.5μl T7E1酶，37℃反应30 min后，立刻跑2%的琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果。（放置时间过长可能会导致PCR产物全部降解。）

阳性参照

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阳性参照是一个碱基的点突变检测。

使用本试剂盒提供阳性参照引物的混合物：

Control-GC-F ACACCTGATCAAGCCTGTTC

Control-GC-R CGCCAAAGAATGATCTGCG

分别以阳性DNA Control C和Control G为模板，PCR扩增出600bp的阳性DNA片段，点突变标示如下：

阳性参照可以分别单独PCR扩增后， PCR产物等量混合，或者混合DNA模板进行PCR扩增，PCR产物进行加热变性、退火复性处理后，用T7E1酶切，产生400bp+200bp两个端片段。

使用限制

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本试剂仅限用于科学研究。

储存与安全

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本品4℃运输，储存于-20℃，有效期12个月。长期储存请置于-80℃。

本 品采用蓝冰运输，蓝冰在使用前在-80℃冷冻至少72小时。实验证明，使用上述方法运输，即使到货时蓝冰已经融化，泡沫塑料盒中的温度仍然能保持在4℃或 4℃以下24小时。比较干冰运输的产品，其活性和稳定性无任何差异。产品纯化整个过程都在4℃进行，且其贮存液经过优化，对保持酶活的稳定性起到重要作 用。产品中含有50%甘油，可以使酶在-35℃下保持液态，若使用干冰运输，酶将被冷冻，发生反复冻融可能会导致酶活性下降。

T7E1酶切法进行基因敲除小鼠的基因型鉴定

T7E1-使用说明-20140724