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文献和实验
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英文名 ：catecholamine kit
儿茶酚胺（3合1）说明书
试剂组成
提取、酰化试剂
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BA1601
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标准品A
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0ng/ml(肾上腺素)；0ng/ml(去甲肾上腺素)；0ng/ml(多巴胺) 1×1ml
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BA1609
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标准品A/B
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2.5ng/ml(多巴胺) 1×1ml
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BA1602
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标准品B
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0.9ng/ml(肾上腺素)；4.5ng/ml(去甲肾上腺素)；10ng/ml(多巴胺) 1×1ml
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BA1603
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标准品C
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3ng/ml(肾上腺素)；15ng/ml(去甲肾上腺素)；40ng/ml(多巴胺) 1×1ml
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BA1604
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标准品D
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9ng/ml(肾上腺素)；45ng/ml(去甲肾上腺素)；160ng/ml(多巴胺) 1×1ml
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BA1605
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标准品E
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30ng/ml(肾上腺素)；150ng/ml(去甲肾上腺素)；640ng/ml(多巴胺) 1×1ml
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BA1606
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标准品F
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90ng/ml(肾上腺素)；450ng/ml(去甲肾上腺素)；2560ng/ml(多巴胺) 1×1ml
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BA1651
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值控1
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1×1ml
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BA1652
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值控2
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1×1ml
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BA1611
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酰化缓冲液
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1×20ml
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BA1612
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酰化试剂
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1×1.5ml
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BA1613
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化验缓冲液
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1×4ml 包含1M盐酸
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BA1617
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提取缓冲液
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1×4ml
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BA1618
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提取盘
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48个小孔，
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BA1619
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盐酸
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1×20ml（黄色）包含0.025M盐酸
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放射免疫测定试剂
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BA1614
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铺酶
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1×0.75ml
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BA1615
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酶
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2×1ml/瓶 干冻
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BA1616
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酶缓冲液
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1×4ml
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BA3030
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分离剂
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3×55ml 使用前请充分混合
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BA0110
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肾上腺素抗血清
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1×2.75ml 蓝色
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BA0120
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125I-肾上腺素
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1×3ml 活性＜100kbp 红色
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BA0210
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去甲肾上腺素抗血清
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1×2.75ml 黄色
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BA0220
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125I-去甲肾上腺素
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1×3ml活性＜100kbp 红色
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BA0310
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多巴胺抗血清
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1×2.75ml 绿色
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BA0320
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125I-多巴胺
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1×3ml活性＜100kbp 红色
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儿茶酚胺（3合1）检测程序
所有药盒中的试剂，在使用前应放置室温平衡。
8.1溶解酶的准备
重要：在每次试验前配制新的溶解酶试剂（按试验需要量配制）。把有“酶”标签的小瓶和1ml蒸馏水充分混合。将0.3ml铺酶加入到0.7ml酶缓冲液中。溶解酶的总体积为2.0ml.
8.2样本的准备、提取和酰化
所有药盒中的试剂，在使用前应放置室温平衡。每15ul标准品，值控1、2和尿液样本分别萃取。每600ul血浆样本萃取。
推荐果断的复制。
1. 吸取15ul标准品，15ul值控和15ul尿液样本分别放入各自的提取盘的小孔中。向这些容器加入500ul蒸馏水。吸取600ul血浆样本加入小孔中以便萃取肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺。（注意：应该在血浆中的多巴胺测定中，标准品要多加入标准品A/B）
2. 吸取50ul检验缓冲液加入小孔中
3. 吸取50ul提取缓冲液加入小孔中
4. 用粘性金属箔覆盖容器并等待反映30min。在室温条件下，放在震荡器上（600-900r/min）
5. 移走金属箔。立即将容器轻轻倒出并移走多余的液体。
6. 吸取150ul酰化物缓冲液加入小孔。
7. 吸取25ul酰化物试剂加入小孔。
8. 在不加入金属箔的情况下等待反应15分钟，在室温环境中并放在震荡器上（600-900r/min）
9. 立即把容器内的试剂轻轻倒出并移走多余液体（参见5）
10. 吸取1ml蒸馏水加入到小孔中
11. 在不加入金属箔的情况下等待反应15分钟，在室温环境中并放在震荡器上（600-900r/min）
12. 立即把容器内的试剂轻轻倒出并移走多余液体（参见5）
13. 吸取200ul盐酸（0.025M）加入到小孔中以便洗提儿茶酚胺。
14. 用粘性金属箔覆盖容器并等待反映10min。在室温条件下，放在震荡器上（600-900r/min）
警告：不要倒出浮在表面上的液体
用于放射免疫鉴定的洗脱液体积量：
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肾上腺素
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去甲肾上腺素
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多巴胺
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100ul
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15ul
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75ul
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儿茶酚胺（3合1）8.3肾上腺素的放射免疫鉴定
在试管（聚苯乙烯）上作标记
1. 吸取100ul盐酸加入到装有NSB的试管内
2. 吸取100ul提取标准品、值控和病人样本加入不同的试管内
3. 吸取25ul溶解酶加入到所有的试管内（除了总T管）
4. 充分混合，37℃水浴30分钟
5. 吸取50ul125I-肾上腺素标记加入到所有的试管
6. 吸取50ul肾上腺素抗血清加入到所有试管中（除了总T管和NSB）
7. 充分混合并使用离心分离机1分钟500xg
8. 在室温情况下等待反应2小时，并震荡（400-500rpm）或者在2-8℃环境中等待反应15-20小时（过夜）
9. 将充分混合冷却(2-8摄氏度)的分离剂,每根试管加入1ml分离剂（除了总T管），并混合
10. 在2-8℃环境中反应15分钟
11. 使用离心分离机工作15分钟3000xg，可能的话使用低温离心分离机。
12. 将浮在表面的液体小心的轻轻倒出或吸出（除了总试管），使试管清洁并倒立2分钟。
13. 使用√计数器将所有试管计数1分钟。
8.4去甲肾上腺素的放射免疫鉴定
在试管（聚苯乙烯）上作标记
1. 吸取15ul盐酸加入到装有NSB的试管内
2. 吸取15ul提取标准品、值控和病人样本加入不同的试管内
3. 吸取25ul溶解酶加入到所有的试管内（除了总T管）
4. 充分混合，37℃水浴30分钟
5. 萃取50ul125I-去甲肾上腺素标记加入到所有的试管
6. 吸取50ul去甲肾上腺素抗血清加入到所有试管中（除了总T管和NSB）
7. 充分混合并使用离心分离机1分钟500xg
8. 在室温情况下等待反应2小时，并震荡（400-500rpm）或者在2-8℃环境中等待反应15-20小时（过夜）
9. 充分混合冷却的试剂,每根试管加入1ml（除了总T管），并混合
10. 在2-8℃环境中反应15分钟
11. 使用离心分离机工作15分钟3000xg，可能的话使用低温离心分离机。
12. 将浮在表面的液体小心的轻轻倒出或吸出（除了总T管），使试管清洁并倒立2分钟。
13. 使用√计数器将所有试管计数1分钟。
8.5多巴胺的放射免疫鉴定
1. 吸取75ul盐酸加入到装有NSB的试管
2. 吸取75ul提取标准品、值控和病人样本加入不同的试管内
3. 吸取25ul溶解酶加入到所有的试管内（除了总T管）
4. 充分混合，37℃水浴30分钟
5. 萃取50ul125I-多巴胺标记加入到所有的试管
6. 吸取50ul多巴胺抗血清加入到所有试管中（除了总T管和NSB）
7. 充分混合并使用离心分离机1分钟500xg
8. 在室温情况下等待反应2小时，并震荡（400-500rpm）或者在2-8℃环境中等待反应15-20小时（过夜）
9. 充分混合冷却的试剂,每根试管加入1ml（除了总T管），并混合
10. 在2-8℃环境中反应15分钟
11. 使用离心分离机工作15分钟3000xg，可能的话使用低温离心分离机。
12. 将浮在表面的液体小心的轻轻倒出或吸出（除了总T管），使试管清洁并倒立2分钟。
13. 使用√计数器将所有试管计数1分钟。
儿茶酚胺（3合1）参考值
以下数值仅供参考，建议实验室制定自己的正常值
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肾上腺素
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去甲肾上腺素
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多巴胺
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尿
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＜20ug/天（110nmol/天）
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＜90ug/天（535nmol/天）
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＜600ug/天（3900nmol/天）
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血浆
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＜100pg/ml
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＜600pg/ml
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＜100pg/ml
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灵敏度
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肾上腺素
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去甲肾上腺素
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多巴胺
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尿
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0.3ng/ml
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1.5 ng/ml
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0.8 ng/ml
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血浆
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7.5 pg/ml
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37.5 pg/ml
|
20 pg/ml
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