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文献和实验
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第五部分:真核细胞转染试剂
一、代理德国Biontex 公司的转染试剂
Biontex 公司成立于1998年,其总部位于德国慕尼黑附近的Martinsried,专注于转染试剂的研发和应用。
(一) K2® Transfection System ,Biontex最新产品
全新高效的哺乳动物细胞DNA和mRNA转染工具
产品特点:
真核细胞依赖自身的先天性免疫系统,能够识别并抑制外来物质(如脂多糖、细菌、病毒核酸及蛋白质)的入侵。此外,细胞还可以将这些外来物质的信息通过信号分子传导给相邻的细胞,使这些临近细胞在无需接触病原体的情况下产生防御体系。
为降低细胞自身的免疫反应,提高基因转染效率,Biontex公司最新开发了K2® Transfection System,由K2® Transfection Reagent 和 K2® Multiplier两部分组成。K2® Transfection Reagent是一种高效的阳离子脂质,而K2® Multiplier则可以降低细胞对外来核酸及脂质体的免疫反应。
应用实例1:
Transfection efficiency of pCMV-GFP by K2® Transfection System and Metafectene Pro compared with a commercial transfection reagent L2k with several cell lines.
应用实例2:
产品订购信息:
(二)METAFECTENE® SI+
特别适合于siRNA或miRNA mimic/inhibitor的高效转染试剂
特点:
METAFECTENE® SI+是一种脂质复合物,经特殊优化适用于siRNA和microRNA转染(siCOM技术),综合了Biontex公司RMA和TOP技术的特点,具有沉默效率高、RNA聚合和毒性低等优点,适用于所有细胞系和原代细胞。
siCOM技术(siRNA adjusted Composition)
不同于一般的DNA转染试剂,本技术不需要将siRNA和miRNA转运到细胞核。因此,METAFECTENE® SI+主要目的在于最大化的内吞作用并快速完全释放RNA进入细胞质。
Sequence of expression of GFP in HeLa-GFP cells transfected with METAFECTENE® SI+ and siRNA directed against the mRNA of the GFP. Clearly visible is the reduction in GFP expression to a maximum knockdown at 72 hours.
产品订购信息:
(三) METAFECTENE® EASY
更快、更简便、更高效的转染技术
特点:
在开发第二代DNA转染试剂(METAFECTENE®及其升级版本METAFECTENE®PRO)的时候,Biontex的主要目标是最大化转染效率(RMA技术)和最小化毒性作用(TOP技术)。进一步开发的Biontex FEE技术预示着第三代质粒转染试剂的开始:METAFECTENE® EASY+。
FEE技术
FEE技术是优化的具更高转染效率的技术,通过固定DNA /脂质体比率和转染复合物体积而适用于广泛的细胞类型。不需要针对每种细胞类型进行费时、费力的条件优化。
METAFECTENE® EASY achieves transfection efficiency rates comparable to those of METAFECTENE® PRO without the need to optimize the DNA/lipid ratio (dark blue columns: COS-7, light blue columns: HeLa cells).
产品订购信息:
(四)METAFECTENE® PRO
真核细胞的高效、低毒性转染试剂
METAFECTENE® PRO是针对哺乳动物细胞的新一代转染试剂。采用毒性优化专利技术(TOP技术),Biontex成功地降低了转染试剂对细胞的毒性,并显著提高DNA进入细胞的效率。除了能加强细胞的转染效率之外,METAFECTENE® PRO的另一个主要特点是提高细胞内基因的表达。
TOP技术(Toxicity Optimization Module)
毒性最小化是现代转染试剂达到最高效率和广泛应用性的首要前提条件。TOP技术的基本准则是模拟物质天然结构,加强生物降解能力,提高细胞耐受性。另外,通过物理化学修饰,降低脂质复合体的稳定性,从而促进DNA在细胞质的释放。
Comparison of transfection efficiency of METAFECTENE® PRO with various cell lines (METAFECTENE® 100%)
产品订购信息:
(五)METAFECTENE®
RMA技术(Repulsive Membrane Acidolysis)
排斥膜酸水解(RMA)专利技术,一方面能促进细胞内涵体中“质子海绵”的活性,另一方面能促进脂质体复合物分解,通过小片段质子化结构模拟磷脂结构。当内涵体处于酸性环境时,正电荷累积在脂质体复合物的磷脂双分子结构中,通过电荷的排斥力,这些电荷最终引起脂质体复合物的分解,同时高效地将DNA/RNA释放到细胞质中。
最后,胞质中非络合的DNA/RNA急剧增多,以DNA为例,这个结果导致其在胞质中的活性显著提升,DNA与细胞核接触的可能性增加,从而大大提高转染效率。
产品订购信息:
其他相关产品:
二、自主生产的转染试剂:HTfect transfection kit
HTfect transfection Kit是盎然生物技术有限公司研发的一种高效、低毒、廉价且重复性好的新型转染试剂,适用于大部分细胞类型。本产品特别适合于HEK293、HeLa、HT1080等细胞的转染,在重组蛋白表达,病毒包装, microRNA靶基因3’-UTR分析、co-IP等实验中用途广泛。同时,本产品也不受血清的干扰,实验操作简单。
产品优势
用HTfect transfection kit 将3 μgpLVX-cmyc-EGFP质粒转染HEK293细胞,两天后使用Olympus倒置荧光显微镜(IX71)进行观察和拍照。(左图为明场细胞图像,右图为绿色荧光细胞图像)。
产品订购信息:
一、代理德国Biontex 公司的转染试剂
Biontex 公司成立于1998年,其总部位于德国慕尼黑附近的Martinsried,专注于转染试剂的研发和应用。
(一) K2® Transfection System ,Biontex最新产品
全新高效的哺乳动物细胞DNA和mRNA转染工具
产品特点:
- 通过抑制细胞对外源DNA的免疫反应来提高转染效率,特别适用于转染人类细胞
- 多数情况下,比其他常见转染试剂(如,Lip2K)有更高转染效率
- 细胞毒性较低
真核细胞依赖自身的先天性免疫系统,能够识别并抑制外来物质(如脂多糖、细菌、病毒核酸及蛋白质)的入侵。此外,细胞还可以将这些外来物质的信息通过信号分子传导给相邻的细胞,使这些临近细胞在无需接触病原体的情况下产生防御体系。
为降低细胞自身的免疫反应,提高基因转染效率,Biontex公司最新开发了K2® Transfection System,由K2® Transfection Reagent 和 K2® Multiplier两部分组成。K2® Transfection Reagent是一种高效的阳离子脂质,而K2® Multiplier则可以降低细胞对外来核酸及脂质体的免疫反应。
应用实例1:
Transfection efficiency of pCMV-GFP by K2® Transfection System and Metafectene Pro compared with a commercial transfection reagent L2k with several cell lines.
应用实例2:
产品订购信息:
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
K2® Transfection System | T060-8.0 | 1.5 ml Transfection reagent 6.5 ml Multiplier |
3770 |
K2® Transfection System | T060-8.2 | 2 X 1.5 ml Transfection reagent 2 X 6.5 ml Multiplier |
7020 |
K2® Transfection System | T060-8.5 | 5 X 1.5 ml Transfection reagent 5 X 6.5 ml Multiplier |
16580 |
(二)METAFECTENE® SI+
特别适合于siRNA或miRNA mimic/inhibitor的高效转染试剂
特点:
- 整合了RMA和TOP技术
- 沉默效率更高,siRNA用量更少
- 操作简便、快速,适合大规模筛选
METAFECTENE® SI+是一种脂质复合物,经特殊优化适用于siRNA和microRNA转染(siCOM技术),综合了Biontex公司RMA和TOP技术的特点,具有沉默效率高、RNA聚合和毒性低等优点,适用于所有细胞系和原代细胞。
siCOM技术(siRNA adjusted Composition)
不同于一般的DNA转染试剂,本技术不需要将siRNA和miRNA转运到细胞核。因此,METAFECTENE® SI+主要目的在于最大化的内吞作用并快速完全释放RNA进入细胞质。
Sequence of expression of GFP in HeLa-GFP cells transfected with METAFECTENE® SI+ and siRNA directed against the mRNA of the GFP. Clearly visible is the reduction in GFP expression to a maximum knockdown at 72 hours.
产品订购信息:
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
METAFECTENE® SI+ | T100-1.0 | 1 ml RNA transfection reagent 2 ml SI+ buffer (10x) |
3692 |
METAFECTENE® SI+ | T100-2.0 | 2 X 1 ml RNA transfection reagent 2 X 2 ml SI+ buffer (10x) |
7072 |
METAFECTENE® SI+ | T100-5.0 | 5 X 1 ml RNA transfection reagent 5 X 2 ml SI+ buffer (10x) |
16393 |
(三) METAFECTENE® EASY
更快、更简便、更高效的转染技术
特点:
- 快速:一次转染实验只需3天
- 简便:优化条件时,只需摸索两个固定的 DNA:lipid比例
- 高效:升级产品提高了转染效率,进一步降低毒性
- 经济:EASY+的显著特征,EASY+降低了核酸复合物(DNA +脂质)所需要的体积,节约至少50%的成本
在开发第二代DNA转染试剂(METAFECTENE®及其升级版本METAFECTENE®PRO)的时候,Biontex的主要目标是最大化转染效率(RMA技术)和最小化毒性作用(TOP技术)。进一步开发的Biontex FEE技术预示着第三代质粒转染试剂的开始:METAFECTENE® EASY+。
FEE技术
FEE技术是优化的具更高转染效率的技术,通过固定DNA /脂质体比率和转染复合物体积而适用于广泛的细胞类型。不需要针对每种细胞类型进行费时、费力的条件优化。
METAFECTENE® EASY achieves transfection efficiency rates comparable to those of METAFECTENE® PRO without the need to optimize the DNA/lipid ratio (dark blue columns: COS-7, light blue columns: HeLa cells).
产品订购信息:
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
METAFECTENE® EASY+ | T090-1.0 | 1 ml Transfection reagent 2 ml EASY+ buffer (10x) |
3484 |
METAFECTENE® EASY+ | T090-2.0 | 2 X 1 ml Transfection reagent 2 X 2 ml EASY+ buffer (10x) |
6539 |
METAFECTENE® EASY+ | T090-5.0 | 5 X 1 ml Transfection reagent 5 X 2 ml EASY+ buffer (10x) |
21697 |
(四)METAFECTENE® PRO
真核细胞的高效、低毒性转染试剂
METAFECTENE® PRO是针对哺乳动物细胞的新一代转染试剂。采用毒性优化专利技术(TOP技术),Biontex成功地降低了转染试剂对细胞的毒性,并显著提高DNA进入细胞的效率。除了能加强细胞的转染效率之外,METAFECTENE® PRO的另一个主要特点是提高细胞内基因的表达。
TOP技术(Toxicity Optimization Module)
毒性最小化是现代转染试剂达到最高效率和广泛应用性的首要前提条件。TOP技术的基本准则是模拟物质天然结构,加强生物降解能力,提高细胞耐受性。另外,通过物理化学修饰,降低脂质复合体的稳定性,从而促进DNA在细胞质的释放。
Comparison of transfection efficiency of METAFECTENE® PRO with various cell lines (METAFECTENE® 100%)
产品订购信息:
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
METAFECTENE® PRO | T040-1.0 | 1 ml Transfection reagent | 3042 |
METAFECTENE® PRO | T040-2.0 | 2 X 1 ml Transfection reagent | 5915 |
METAFECTENE® PRO | T040-5.0 | 5 X 1 ml Transfection reagent | 13728 |
(五)METAFECTENE®
- METAFECTENE®是一种基于脂质体的包含阳离子和中性脂质的复合物,在DNA转染哺乳动物细胞时达到很高的转染效率。属于第二代转染试剂。
- 独创的RMA技术是高效转染率的保证。另外,METAFECTENE®的低毒性和耐受血清抑制等特性使其具有广泛的应用空间。
RMA技术(Repulsive Membrane Acidolysis)
排斥膜酸水解(RMA)专利技术,一方面能促进细胞内涵体中“质子海绵”的活性,另一方面能促进脂质体复合物分解,通过小片段质子化结构模拟磷脂结构。当内涵体处于酸性环境时,正电荷累积在脂质体复合物的磷脂双分子结构中,通过电荷的排斥力,这些电荷最终引起脂质体复合物的分解,同时高效地将DNA/RNA释放到细胞质中。
最后,胞质中非络合的DNA/RNA急剧增多,以DNA为例,这个结果导致其在胞质中的活性显著提升,DNA与细胞核接触的可能性增加,从而大大提高转染效率。
产品订购信息:
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
METAFECTENE® | T020-1.0 | 1 ml Transfection reagent | 2470 |
METAFECTENE® | T020-2.0 | 2 X 1 ml Transfection reagent | 4511 |
METAFECTENE® | T020-5.0 | 5 X 1 ml Transfection reagent | 10100 |
其他相关产品:
产品名称 | 产品介绍 | 规格 | 货号 | 价格 |
METAFECTENE® FluoR | 转染全过程可视化 低毒性:维持细胞最佳形态 可使用显微镜观察细胞密度 应用:转染真核细胞 |
0.5 ml 1.0 ml |
T050-0.5 T050-1.0 |
1748.5 3009.5 |
INSECTOGENE | 简便、高效地转染昆虫细胞生产重组蛋白; 与杆状病毒表达系统兼容; 耐受血清抑制; 快速,操作简便; 性价比高 应用:昆虫细胞转染 |
1 ml 2 X 1ml 5 X 1ml |
T030-1.0 T030-2.0 T030-5.0 |
2119 3880 8625 |
DOTAP | 第一代转染试剂 用于DNA或者反义核苷酸寡聚体转染哺乳动物细胞。价格便宜,已被大量文献报道。 |
1 ml 2 X 1ml 5 X 1ml |
T010-1.0 T010-2.0 T010-5.0 |
1261 2112 4180 |
PROTEOfectene® | 快速、高效的蛋白转染试剂 广泛适用于各种蛋白质转染和各种细胞类型 低毒性,耐受血清抑制 |
0.1 ml 0.25 ml 0.5 ml |
E010-0.1 E010-0.25 E010-0.5 |
3523 7215 13078 |
PROTEOfectene® AB | 快速、高效的蛋白转染试剂 广泛适用于各种蛋白质转染和各种细胞类型 低毒性,全血清耐受 具有所有同型抗原的单克隆/多克隆抗体 |
0.1 ml 0.25 ml 0.5 ml |
E020-0.1 E020-0.25 E020-0.5 |
3523 7215 13078 |
二、自主生产的转染试剂:HTfect transfection kit
HTfect transfection Kit是盎然生物技术有限公司研发的一种高效、低毒、廉价且重复性好的新型转染试剂,适用于大部分细胞类型。本产品特别适合于HEK293、HeLa、HT1080等细胞的转染,在重组蛋白表达,病毒包装, microRNA靶基因3’-UTR分析、co-IP等实验中用途广泛。同时,本产品也不受血清的干扰,实验操作简单。
产品优势
- 转染效率高,尤其对HEK293T细胞的转染效率高达95%以上。
- 细胞毒性小,显著低于L2K等试剂。
- 转染过程中无需更换无血清培养液,操作简单。
- 性价比高,特别适合大规模转染实验,如表达重组蛋白或者包装病毒等。
- 结果重复性好。
用HTfect transfection kit 将3 μgpLVX-cmyc-EGFP质粒转染HEK293细胞,两天后使用Olympus倒置荧光显微镜(IX71)进行观察和拍照。(左图为明场细胞图像,右图为绿色荧光细胞图像)。
产品订购信息:
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
Htfect transfection kit | AB-TP1001 | Sol.A 1.25 ml Sol.B 20 ml |
765 |
Htfect transfection kit | AB-TP1002 | Sol.A 2.5 ml Sol.B 40 ml |
1445 |
Htfect transfection kit | AB-TP1003 | Sol.A 5 ml Sol.B 80 ml |
2750 |
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