文献支持保证型单克隆抗体制备（抗体定制）| 保证型鼠单克隆抗体制备服务（特异性更强，灵敏度更高）

服务名称 ：保证型单克隆抗体制备

提供商 ：武汉金开瑞生物工程有限公司

规格 ：视具体情况而定，详情请咨询

服务领域的应用专家，打破研究和应用之间的壁垒！

您在实验中是否曾因为抗体不达标、样品量小、标签暴露不充分、融合蛋白变性等问题而烦恼；是否还在为寻找未知靶点的高灵敏度单克隆抗体而焦虑？不用担心，金开瑞生物工程有限公司特推出保证型抗体定制套餐，让您的这些顾虑和烦恼迎刃而解！金开瑞的单克隆抗体定制平台，由多位应用设计专家和工程设计专家合力打造而成，在过去的1年中，平台为客户成功表达并制备了100多种高质量的单克隆抗体并成功投产。其中部分抗体质量已经与多家全球知名生物公司抗体相仿甚至超越，达到了临床应用质量标准。
 

服务简介

与多克隆抗体相比，单克隆抗体针对单一的抗原表位，具有特异性更强，灵敏度更高的特点。使用单克隆抗体可免除不同细胞及微生物种或株间血清学上的交叉反应，大大提高诊断的特异性及敏感度。同时，单克隆抗体在研究细胞表面标志、提纯可溶性抗原、进一步研究抗体的结构和功能、抗体药物研究等方面都起到十分重要的作用。

服务优势

• 一站式：可提供从基因合成、抗原表达到抗体制备的一站式抗体服务;
• 大规模：提供最专业的单克隆抗体大规模生产服务，满足诊断级大量生产的需求;
• 质控严：提供ELISA. WB. IHC等基础试验及化学发光、胶体金、胶乳增强免疫比浊等临床诊断的应用型抗体定制

服务流程

客户提供

重组蛋白：至少2-3 mg，蛋白纯度大于90%，浓度不低于0.5 mg/mL，蛋白分子量大于10kDa；

多肽：裸肽1 mg，偶联KLH/BSA/OVA或其他载体蛋白3-4 mg，裸肽纯度大于90%，序列长度不少于10个AA；

病毒/细菌/胶条/天然蛋白等抗原类型请具体咨询，另外也可选择由金开瑞制备抗原。

最终交付

2-5株杂交瘤细胞株和最好1株提供5-10 mg腹水纯化的抗体；

鉴定报告，包括小鼠血清效价，杂交瘤的构建（融合率、阳性率）、杂交瘤的克隆化、杂交瘤培养上清液的抗体特异性检测，以及杂交瘤诱生腹水的ELISA效价检测，并根据客户的需求，提供抗体验证结果，如WB、IP、IF等。

服务说明

 

服务流程		交付结果	服务周期
抗原分析及设计		免疫原序列	1 个工作日
抗原制备	重组蛋白制备	表达克隆测序报告	4-7周
	多肤合成及偶连	MS 和HPLC 质控报告	3-4周
动物免疫		免疫前血清 50ul	6-8周
效价检测		抗血清ELISA 及 WB 检测结果	1-2 工作日
融合		/	1 个工作日
亚克隆筛选		根据客户需求给予中间亚克隆检测结果	4-8周
定株克隆亚型鉴定及抗体纯化验证		筛选出＜ 20 株高亲和力的杂交瘤细胞培养上清寄送给客户验证，	2-3周
		以便客户淘选出更多应用需求的单克隆抗体，沟通确认后进行抗体纯化及最终验证
结题报告发货及最终发货		发货前发送结题报告，包含定制过程中所有原始数据、图片及质控报告，	3-5工作日
		双方确认后，按照合同约定的所有内容进行交付

案例展示

项目背景

客户提供：质粒模板；

项目要求：抗体可以做内源样本的WB

制备流程

1、抗原制备

根据目标蛋白的序列分析结果，选择合适的表达载体及宿主进行重组表达及纯化，该项目我们最终选用大肠表达系统，放大制备抗原。

2、抗体制备

2.1 免疫：2种方案，免疫8只BalB/C小鼠，效价如下：

PA1-1704001-**蛋白三免效价
稀释度	1-左	1-右	1-中	1-无	2-左	2-右	2-中	2-无	空白血
1/1000	2.7311	2.8809	2.8325	2.856	2.981	2.856	2.8325	3.2662	0.6045
1/2000	2.6592	2.953	2.758	2.6977	2.886	2.7488	2.7966	3.0321	0.3088
1/4000	2.6467	2.8027	2.7082	2.9085	2.8027	2.7912	2.9085	3.2918	0.0952
1/8000	2.7585	2.8302	2.9589	2.8531	2.7681	2.8531	2.9741	3.1203	0.095
1/16000	2.7819	2.837	2.837	2.7239	2.837	2.8867	2.837	3.2912	0.0399
1/32000	2.438	2.7804	2.6835	2.7592	2.6582	2.6749	2.7293	3.0023	0.0242
1/64000	2.0077	2.4377	2.4713	2.1855	2.3734	2.3577	2.3655	2.6948	0.0076
1/128000	1.2849	2.0094	2.1806	1.5955	1.5993	1.9036	2.0281	2.4623	0.012

PA1-1704001-**蛋白四免效价
稀释度	1-左	1-右	1-中	1-无	2-左	2-右	2-中	2-无	空白血
1/1000	2.835	2.8443	2.8943	2.835	3.1453	2.916	3.0599	2.8366	1.254
1/2000	2.6964	2.7657	2.8584	2.9502	2.9376	2.9502	2.8482	2.9124	0.883
1/4000	2.7976	2.8283	2.7878	2.8178	3.0261	2.8613	3.0431	2.9992	0.3678
1/8000	2.7034	2.8075	2.7034	2.8655	2.8553	2.876	2.8453	3.1467	0.0801
1/16000	2.5778	2.6528	2.7674	2.8014	2.8014	2.8582	2.8788	3.0167	0.0963
1/32000	2.5072	2.6615	2.6189	2.5749	2.7381	2.7381	2.7232	2.9619	0.0437
1/64000	2.3246	2.5952	2.5054	2.4474	2.5249	2.6319	2.5506	2.5236	0.0306
1/128000	1.8411	2.4785	2.2799	1.9458	2.2455	2.3142	2.2455	2.0905	0.04

2.2 融合以及筛选：加强3天后，项目融合，采用液体和半固体相配合的模式，挑取有效克隆1500多个，考虑到客户的最终应用，将天然样本的WB验证提前放到筛选中，挑选出高特异性、强反应度的细胞株进行接下来的亚克隆，直至最终获取了6株可在WB中很好识别客户样本的细胞株并进行接下来的稳定筛选。

2.3 亚克隆阶段验证结果

2.4 腹水制备及抗体纯化

2.5 抗体滴度验证

包被原：1704001蛋白			包被浓度：1 μg/mL	项目编号：PA1-1704001
抗体批号：20170921			检测人：***	检测时间：20170928
株号	一抗浓度	OD值
2G3 1D7	1 μg/mL	3.3454
	0.5 μg/mL	3.1243
	0.25 μg/mL	3.2693
	0.125 μg/mL	2.905
	62.5 ng/mL	2.601
	31.25 ng/mL	2.5372
	15.625 ng/mL	2.0696
	7.813 ng/mL	1.5639
	3.906 ng/mL	0.9619
	1.953 ng/mL	0.5392
	0.977 ng/mL	0.2845
	0.498 ng/mL	0.1501
	0	0.0243

相关资源

 单克隆抗体的制备基于免疫学原理和细胞生物学技术，主要包括以下步骤：

    1、免疫原的选择：选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、糖类等。免疫原的纯度和质量对于获得高质量的单克隆抗体至关重要。

    2、免疫过程：将免疫原注射到实验动物（通常为小鼠）体内，激活其免疫系统产生特异性抗体。免疫过程可以包括多次免疫注射，通常在一定时间间隔内进行。

    3、融合细胞的制备：在免疫过程中，从免疫动物体内获取免疫细胞，例如脾细胞。此后，与骨髓瘤细胞（如骨髓瘤细胞系SP2/0或NS0）融合，形成杂交瘤细胞。

    4、杂交瘤筛选：杂交瘤细胞具有双重性状，能够无限增殖并产生抗体。通过培养和筛选，选择具有所需特异性抗体的单个杂交瘤细胞克隆。

    5、单克隆抗体的生产：经过杂交瘤克隆的单克隆细胞株将被扩增和培养，以产生大量的单克隆抗体。培养过程中可使用适当的培养基和培养条件来优化抗体产量和质量。

    6、抗体纯化：从培养上清液中提取单克隆抗体，并进行纯化步骤，如蛋白A/G亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等，以获得高纯度的单克隆抗体。

    7、抗体验证和应用：对获得的单克隆抗体进行验证，例如Western blot、ELISA、免疫组化等技术，以确认其特异性和功能。然后可以将单克隆抗体应用

 单克隆抗体常见的应用验证：

    免疫组织化学（IHC）：单克隆抗体可用于免疫组织化学染色，以检测和定位目标蛋白在组织或细胞中的表达情况。通过与组织中特定抗原的结合，单克隆抗体可以提供细胞定位和定量分析的信息。

    免疫印迹（Western Blot，WB）：单克隆抗体可用于wb免疫印迹分析，用于检测和鉴定目标蛋白在蛋白质混合物中的表达和大小。通过与特定蛋白的结合，单克隆抗体可以提供高度特异性和敏感性的信号。

    免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：单克隆抗体可用于IP免疫沉淀实验，用于研究蛋白质间的相互作用和复合物的形成。通过与目标蛋白特异结合并随后沉淀，单克隆抗体可以帮助分离和鉴定与目标蛋白相互作用的其他蛋白质。

    免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CO-IP）：类似于免疫沉淀，单克隆抗体可用于coip免疫共沉淀实验，用于研究目标蛋白与其他特定蛋白之间的相互作用。通过与目标蛋白的结合并随后沉淀，单克隆抗体可以帮助确定目标蛋白与特定交互蛋白的存在和稳定性。

    免疫组化（Immunofluorescence，IF）： 单克隆抗体可用于if免疫组化实验，用于检测和定位细胞或组织中目标蛋白的表达和分布。通过与特定抗原的结合，单克隆抗体可以提供高度特异性和荧光信号，从而使目标蛋白在细胞或组织中的可视化成为可能。

    流式细胞术（Flow Cytometry，FC）：单克隆抗体可用于fc流式细胞术，以定量分析细胞表面抗原的表达。通过与特定抗原的结合，单克隆抗体可以帮助识别和分类不同细胞亚群，并评估它们在特定条件下的数量和分布。

 单克隆抗体与多克隆抗体的对比：
 

	单克隆抗体	多克隆抗体
生产方式	由单个克隆细胞分泌产生，具有单一的抗原特异性	由多个克隆细胞分泌产生，每个克隆细胞可能对抗原的不同部分产生不同的抗体
抗原特异性	具有高度特异性，只结合于抗原的一个特定位点（表位）	可以结合于抗原的多个不同位点，具有更广泛的抗原覆盖能力
纯度和一致性	由单一的克隆细胞产生，具有较高的纯度和一致性	由多个克隆细胞产生，存在一定的异质性，可能包含不同的抗体亚型和特异性
价格	通常较多克隆抗体价格更高，	相对较为经济实惠
	因为其制备过程更复杂且需要较长的时间
应用范围	由于其高度特异性和一致性，更适用于需要高度准确和可重复的实验和应用，如临床诊断、药物研发和精准医学等	由于其较宽泛的抗原覆盖能力，更适用于初步筛选、生物学研究和一些工业应用等

小结

该项目进展较顺利，整个项目历时20周。客户提供项目序列信息及克隆质粒，由金开瑞进行抗原设计、蛋白表达纯化、抗体筛选及抗体验证等一系列工作，最终筛选出可识别內源性样本的单克隆抗体，远远超出客户预期。其次制备阶段，针对节点性的数据我们会及时跟客户沟通，使其对整个项目的进度了如指掌，通过此项目的合作，与客户建立了长期合作的良好关系。
 

• 引用文献

[1]He Jing,Zhu Ya′nan,Wang Bingcai,Yang Pengcheng,Guo Wei,Liang Bo,Jiang Feng,Wang Huimin,Wei Yuanyuan,Kang Le. piRNA-guided intron removal from pre-mRNAs regulates density-dependent reproductive strategy[J]. Cell Reports,2022,39(4).