服务名称：RRBS甲基化测序

提供商：上海惠研生物科技有限公司

规格：欢迎致电询价。

表观组测序 RRBS甲基化测

检测DNA甲基化的方法有很多种，在众多方法中，研究人员常常会使用到一项技术，那就是亚硫酸氢盐转化。DNA的亚硫酸氢盐处理将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后用测序、定量PCR和芯片等分析来比较处理和未处理DNA的序列，就能确定哪些碱基是甲基化的。

DNA甲基化是重要的表观遗传学标记信息，获得全基因组范围内所有C位点的甲基化水平数据，对于表观遗传学的时空特异性研究具有重要意义。我们以新一代高通量测序平台为基础，结合全基因组Bisulfite处理和生物信息数据分析技术，进行低成本、高效率、高准确度的全基因组DNA甲基化水平图谱绘制。特定物种的高精确度甲基化修饰模式的分析，必将在表观基因组学研究中具有里程碑式的意义，并为细胞分化、组织发育等基础机制研究，以及动植物育种、人类健康与疾病研究奠定基础。

RRBS 测序的优势

检测精度高：单碱基分辨率，精确分析每一个C碱基的甲基化状态；
效率高，耗时少：借助新一代高通量测序平台，对全基因组5mC信息进行高效扫描；
重复性好：多样本的覆盖区域重复性可达到85%-95%，适用于多样本间的差异分析；
检测范围广：覆盖全基因组范围内超过5百万个CpG位点；
性价比高：相对于传统PCR+Sanger测序方法，费用少。
采用EZ DNA Methylattion-Gold kit进行Bisulfite处理,转化率高达99%

科学方案设计

实验流程

重亚硫酸盐转换原理

检测DNA甲基化的方法有很多种，在众多方法中，研究人员常常会使用到一项技术，那就是亚硫酸氢盐转化。DNA的亚硫酸氢盐处理将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后用测序、定量PCR和芯片等分析来比较处理和未处理DNA的序列，就能确定哪些碱基是甲基化的。重亚硫酸盐（HSO3-）可将未甲基化C转换为U，但不能将甲基化C转变为T。

DNA测序技术在重亚硫酸盐处理样本前后对DNA基因组进行测序，经前后序列比对可判别甲基化状态。

采用EZ DNA Methylattion-Gold kit进行Bisulfite处理

EZ DNA Methylation-Gold Kit是EZ DNA Methylation Kit的改进版。EZ DNA Methylation-Gold Kit将DNA变性过程和亚硫酸氢盐转化过程合成一步，使整个过程更快，可在3小时内完成。此步骤采用温度变性来取代之前方案中使用sodium hydroxide的化学变性过程。转化之后，试剂盒可回收75%以上的DNA。

试剂盒的设计可以减少模板降解和纯化过程中的DNA损失，并且完全转化未甲基化的胞嘧啶,转化效率在99%以上。回收的DNA对于PCR扩增、限制性内切酶消化、测序、芯片等下游分析是很理想的。

若你的样品量很少，Zymo还提供了另外一个好选择——EZ DNA Methylation-Direct Kit。它能够彻底转化来自血液、组织、细胞、FFPE和LCM样品中的DNA，而事先无需纯化。这款试剂盒的灵敏度更高，即使10个细胞或50 pg DNA也能对付，DNA回收率在80%以上。与EZ DNA Methylation-Gold Kit一样，DNA变性和亚硫酸氢盐转化是一步完成的。

测序工作流程

我们的优势

拥有标准化操作实验室和高通量测序技术平台，实验周期短，质量可靠。
拥有Illumina HiSeq 2500、MiSeq等多种高通量测序平台。
技术人员经验丰富，可以根据合作伙伴要求提供实验方案、解决实验问题、分析实验结果。
拥有专业的生物信息团队和超算服务器，可为合作伙伴提供全面生物信息分析服务与技术支持。

技术参数

一、样本要求

总量：≥ 3 μg DNA（常规样本），≥ 5 μg DNA（FFPE或降解DNA样本）；

纯度：OD260/280 = 1.8-2.0；

样品完整性：DNA无明显降解与蛋白污染，需提供凝胶电泳检测胶图；

适用物种：人和小鼠

二、测序策略： 50 PE。

三、推荐数据量：3G或5G clean data。

四、项目执行周期

单个样品标准流程（上图）的运转周期约为45个工作日。遇样品数较多时，项目周期根据项目规模而定。

五、合格指标

产生不低于合同规定的clean data。

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