细胞功能实验服务，

细胞功能检测技术服务
锐赛生物优秀的技术团队将上下游实验与细胞功能实验完善整合，通过良好的对照设置与过往项目的经验，将诸多问题消灭在实验设计阶段。拥有多年操作经验的实验团队在细胞培养、细胞增殖、周期、凋亡、Confocal、Trasnwell检测方面拥有丰富的经验，为您提供真实可靠的实验数据。

1，稳转细胞株构建

实验原理

稳转细胞株是指经合适的药物浓度进行药物筛选后，得到外源DNA稳定整合到宿主染色体，并可以长时间表达外源目的基因的细胞。稳定表达细胞株弥补了瞬时感染（或转染）实验中外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察。稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的抗性筛选有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）、灭稻瘟素（Blasticidin）等。若实验需求构建稳转细胞株，我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法，此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组，且整合位点处于转录相对活跃的区域，从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。

实验流程






2，细胞凋亡检测

实验原理

细胞凋亡（Cell apoptosis）是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下的损伤，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
细胞凋亡检测的方法很多，我们采用的Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的原理：磷脂酰丝氨酸（Phosphatidyl serine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行EGFP融合、荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针。

实验流程






3，CCK-8检测，细胞增殖，毒性检测

实验原理

CCK-8（Cell Counting kit-8）试剂中含有WST–8：化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基.苯基)-3-(4-硝基.苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲.酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan），生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比，可采用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，间接反映活细胞数量。

实验流程

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