酵母单杂交

酵母单杂交

酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报告基因表达的原理，克隆与靶元件特异结合的转录因子基因的有效方法。其理论基础是：许多真核生物的转录因子由功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain，BD)和转录激活区(Activation domain，AD)组成，因此可构建各种基因与AD的融合的表达载体，在酵母中表达为融合蛋白时，根据报告基因的表达情况，便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白。
酵母单杂交的应用：
1. 确定已知DNA—蛋白质之间是否存在相互作用；
2. 筛选结合于目的顺式调控元件或其他短DNA序列的新基因；
3. 确定蛋白结合DNA的结构域，准确定位与DNA结合的蛋白序列。
酵母单杂交系统：Clontech Matchmaker One-Hybrid system
诱饵蛋白载体：pGADT7-Rec ，pGADT7-Rec2；
目的DNA序列克隆载体：pAbAi，pHIS2.1；
酵母菌株：Y2H，Y187。
服务内容：
1. 构建包含目的片段及蛋白的质粒；
2. 重组质粒转化至酵母细胞；
3. 阳性克隆菌株的筛选。
服务及价格：

项目名称	项目说明	单价	周期
载体构建	1500bp以下	800元/载体	1-2周
	1500-2500bp	1800元/载体
	2500-3500bp	3000元/载体	2-3周
酵母单杂交	质粒转化酵母	500/反应	2-3周
	自激活3-AT(AbA)浓度筛选	500/组
	确定蛋白DNA互作结果	500/组

提交的产品和资料：
1. 构建成功的载体及酵母菌株；
2. 完整的实验报告。
蛋白与DNA单杂交验证反应示例：
1. pGADT7-Rec2-蛋白+ pHIS2.1-DNA片段；
2. pGADT7-Rec2-蛋白+ pHIS2.1；
3. pGADT7-Rec2+ pHIS2.1-DNA片段；
4. pGADT7-Rec2+ pHIS2.1；
5. pGADT7-Rec2-p53 + pHIS2.1-p53。