凝胶迁移实验EMSA

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服务名称：凝胶迁移实验EMSA

提供商：凯基生物

凝胶迁移实验EMSA

实验目的：检测待测样品中特定目的核蛋白的转录调控活性。
实验原理：蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合，在琼脂糖胶或非变性胶中电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢，即表现为相对滞后。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，并可通过加入特异性的抗体（supershift）来检测特定的蛋白质，进行未知蛋白的鉴定。
实验材料：
试剂：核蛋白提取试剂盒、bradford法蛋白含量测定试剂盒、生物素标记 3’端 DNA试剂盒、Lightshift EMSA Optimization & Control Kit、化学发光法核酸检测试剂盒。
仪器：恒温培养箱、蛋白电泳仪、低温冰箱。恒温水浴箱、紫外交联灯、振荡器、脱色摇床。
实验内容与方法：
1、核蛋白样本提取与蛋白定量。
2、生物素标记DNA3’端并去吹TdT。
3、Super-Shift反应，配制6.5%聚丙·烯酰胺凝胶，配制好各反应体系，EMSA室温结合反应20min，电泳上样。
4、电转膜，操作方法同常规Western blot转膜操作。
5、紫外交联，将核酸交联于PVDF膜上。
6、化学发光法检测生物素标记的探针。
客户提供实验信息：
1、实验信息（客户提供）：
样本来源：细胞种属来源__________ or 组织组织来源_________
样本数量：__________
检测蛋白信息：目的蛋白名称_______________ 蛋白分子量_________
2、实验材料提供：
（1）样本材料（客户提供，运送方法见P ）：
新鲜或冷冻细胞不少于10⁶个，新鲜或冷冻组织样本不少于50 mg。
已提取的蛋白样品蛋白含量不低于0.1ug/ul。
（2）试剂：蛋白提取与定量可根据客户要求选用特定试剂盒，如客户不提供
试剂盒且无特别要求，则选用凯基公司相应试剂盒产品。Super-shift反应所用试剂盒同上，凯基也可以提供试剂盒代订服务。
服务周期：（2到8周，根据样本数量而定）
结果提交：提交实验报告书（包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析）、原始数据、图片，文本或电子版。
实验范例：

细胞中AP-1蛋白转录活性实验
灰度分析

样品编号	阳性面积	阳性平均灰度	背景灰度	净灰度	阳性灰度积
空白	1450	176	176	0	0
1	3177	209	175	34	108018
2	6553	211	175	36	235908
3	4995	199	174	25	124875
4	5618	211	174	37	207866
5	1936	182	173	9	17424
6	4752	197	172	25	118800
7	4547	202	171	31	140957
8	4967	196	171	25	124175
9	1854	175	170	5	9270
10	5210	187	170	17	88570
11	6360	200	170	30	190800
12	4863	198	170	28	136164
阳性对照	7519	201	170	31	233089
竞争	4057	197	171	26	105482