产品详情
文献和实验
相关推荐
保质期 ：一年以上
英文名 ：mitochondrial extraction kit
库存 ：大量
供应商 ：Solarbio
CAS号 ：-
保存条件 ：四周内使用可4℃储存，长期保存请置于-20℃。
规格 ：50T/100T
产品简介：
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤：
1. 样本处理 a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次； b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800g离心5~10 min收集细胞，计数。每次提取需要5×107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g 离心5 min。
3. 取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g再次离心5 min。
4. 取上清，转移至新的离心管中，4℃， 12,000 g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5. 往线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000 g 离心5 min。
6. 取上清，转移至新的离心管中，4℃， 12,000 g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。
注意事项：
1. 为保证获得完整的线粒体，务必做到：第一，全程低温操作；第二，快速；第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞，这是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。 转速与离心力换算： G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２ G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示； [rpm]２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。
相关产品： P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1015 4×蛋白上样缓冲液（含 DTT）
SN0020 细胞核提取试剂盒
货号：SM0020
规格：50T/100T
保存：四周内使用可 4℃储存，长期保存请置于-20℃
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤：
1. 样本处理 a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次； b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800g离心5~10 min收集细胞，计数。每次提取需要5×107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g 离心5 min。
3. 取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g再次离心5 min。
4. 取上清，转移至新的离心管中，4℃， 12,000 g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5. 往线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000 g 离心5 min。
6. 取上清，转移至新的离心管中，4℃， 12,000 g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。
注意事项：
1. 为保证获得完整的线粒体，务必做到：第一，全程低温操作；第二，快速；第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞，这是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。 转速与离心力换算： G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２ G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示； [rpm]２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。
相关产品： P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1015 4×蛋白上样缓冲液（含 DTT）
SN0020 细胞核提取试剂盒
货号：SM0020
规格：50T/100T
保存：四周内使用可 4℃储存，长期保存请置于-20℃
相关论文：《Aggregated single-walled carbon nanotubes attenuate the behavioural and neurochemical effects of methamphetamine in mice》 作者：Xue Xue Jing-Yu Yang Yi He Li-Rong Wang Ping Liu L 期刊：《Nature Nanotechnology 11, 613-620 (2016)》 影响因子：38.986 PMID：26974957
索莱宝供应各种生化试剂，染色液，分离液，抗体，Elisa试剂盒，生化试剂盒，各种实验耗材。产品适合于高校，科研院所，医院及生物行业的工业生产需求。索莱宝致力于为科研工作者提供一站式的便携采购。https://sobio.biomart.cn/
北京索莱宝科技有限公司
品牌商实名认证
钻石会员
入驻年限：12年
