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保存条件 :-20℃
保质期 :现询客服
英文名 :Universal RT-PCR Kit(M-MLV)
库存 :大量
供应商 :索莱宝
CAS号 :RP1100
规格 :25T/50T/100T
QQ:2748554845
产品名称:通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)
货号:RP1100
规格:50T/100T
保存:-20℃保存,避免反复冻融,复检期为 1年。
产品内容:
试剂盒组成 | 50 次 | 100次 |
M-MLV(200U/ul) | 50ul | 50ul×2 |
5×M-MLV Buffer | 200ul | 400ul |
Oligo(dT)16(10uM) | 100ul | 200ul |
RNasin(40U/ul) | 25ul | 50ul |
dNTPs(10mM) | 100ul | 200ul |
Taq Polymerase(5U/ul) | 25ul | 50ul |
10×PCR Buffer | 250ul | 500ul |
MgCl2(25mM) | 200ul | 400ul |
RNase-free ddH2O | 1ml | 1ml×2 |
说明书 | 1 份 | 1 份 |
产品简介:
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应,能够获得较长的反转录产物。同时,在 20ul 反转录体系和 50ul PCR 反应体系中,还可以一次性得到足够量的 PCR 产物用于后续的克隆实验。
本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的 M-MLV,所以 cDNA 更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的 RNase抑制剂可有效降低由于外源 RNase污染而导致实验失败的风险。
本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于 cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
操作步骤:
一、反转录反应
1、在冰浴的无 RNase 的离心管中加入如下反应成分:
1-5ug 总RNA或 50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT)16或 2 pmole基因特异性引物
补RNase-free ddH2O至 14.5ul
2、70℃保温5min 后迅速在冰上冷却 2min,简短离心收集反应液后加入以下各组分:
4ul 5×M-MLV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul M-MLV
3、42℃温浴60min,如果是用随机引物,请先将离心管置 25℃温浴 10min,再 42℃温浴 60min。
4、95℃加热5min 终止反应,置冰上进行后续实验或-20℃保存。
5、用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50ul,取2-5ul进行PCR反应。
二、PCR反应
1、按以下各组分配制 50ul PCR 反应体系:
10×PCR Buffer 5ul
MgCl2 4ul
dNTPs 1ul
上游引物(用户自备 10um) 1ul
下游引物(用户自备 10um) 1ul
RT 反应产物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混匀后短暂离心,PCR 仪扩增,琼脂糖凝胶电泳观察结果。
注意事项:
1、 用于 cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用 DEPC 进行处理,并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时,首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行过滤除菌处理。
2、 试剂盒的各组分应在-20℃保存,避免反复冻融,有效期 12个月。
3、 RNA样品要避免反复多次冻融,应使 RNA在冰浴中处于融化状态。
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本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应,能够获得较长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配制的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)产品简介
莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV RT)是一种RNA依赖的DNA聚合酶,能使mRNA(>5kb)转录为cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相对于禽成髓细胞瘤病毒反转录酶较弱,更适合用来反转录较长的mRNA。M-MLV RT应用于以RNA为模板合成cDNA的第一条链。
注意:M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反转录酶,因此要得到和用AMV 反转录酶一样产量的cDNA需加入更多单位的M-MLV反转录酶。
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)使用方法
1)使用方法简介以用2mg总RNA为例。在无RNase离心管中,加入0.5mg引物至含总RNA的样品中,总体积不大于15ml。70℃,5分钟打开模板链形成的二级结构。立即放于冰上降温防止二级结构恢复,随后短暂离心使液体集中在离心管底。
2)加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。
注意:不要改变引物的加入比率。
M-MLV 5×Reaction Buffer 5ml
dATP,10mM 1.25ml
dCTP,10mM 1.25ml
dGTP,10mM 1.25ml
dTTP,10mM 1.25ml
Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor 25 units
M-MLV RT 200 units
无核酸水至最后体积 25ml
3)轻轻混匀离心管,如果使用随机引物在37℃孵育60分钟,其他引物则42℃孵育。延伸温度在37~42℃之间最佳。
4)M-MLV RT 用于合成cDNA的第一链。往后的合成则需要根据需要自行设计引物再次合成。
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)Buffer组成
M-MLV RT 5×Reaction Buffer
250mM Tris-HCl(PH 8.3 室温下)
375mM KCl
15mM MgCl2
50mM DTT
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)来源
大肠杆菌表达纯化
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)保存条件
-20℃保存。避免经常冻融。
北京索莱宝科技有限公司
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