Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

英文名 ：AlamaBlue Cell Viability Assay Kit

供应商 ：凯基生物

保存条件 ：4℃，避光

规格 ：5 mL/10 mL/25 mL

一、 试剂盒说明
AlamaBlue细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamaBlue通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应，将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质，试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），从而检测细胞的存活率。维持细胞生产需要还原性环境而抑制生长则表现为氧化型环境。细胞生长率相关的降低可表现为氧化还原指示剂从氧化型（非荧光素、紫色）转为还原型（荧光素、红色）。该荧光信号可以用530~560nm的激发波激发，在590nm处可以获发射波，检测570和600nm的的吸光度值，校正监测值，可以减去相应的570nm和600nm的背景吸光度值。检测所产生的荧光信号是与样品中的活细胞数成正比的。
AlamaBlue细胞活性检测试剂盒的灵敏度相似于[3H]胸苷法检测细胞增殖法。根据不同类型的细胞，AlamaBlue可以检测到至少40个细胞，同时保证很好的重现性和灵敏度。作为试卤灵（紫红、红色荧光）可以进一步被还原为水解化的试卤灵（无色、无荧光），当细胞数量增多，所有的刃天青（7-羟基-3-羰基-10-氧化-三氢吩恶嗪）被转换为试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），试剂盒的信号反而会发生衰减。因此，对于您所用的试剂盒来说，针对不同的细胞类型，应该调整您的细胞数，做相应的优化，才能得到更好的结果。
二、 试剂盒组份

组 份	Cat: KG328 500T	Cat: KG328-1 1000T	Cat: KG328-2 2500T	储存条件
AlarmaBlue即用液	5 mL	10 mL	25 mL	4℃，避光

三、 操作说明
以下操作可用作通用指导建议。考虑不同细胞类型与培养条件的差异性，有必要根据实际情况优化您的操作步骤。
1、96孔细胞培养板每孔100μL培养基饲养细胞，控制细胞数目在40~10000个/贴壁细胞，2000~500000个/悬浮细胞。设置空培养基做对照。
2、加入10μL AlamaBlue溶液至培养基中，37度孵育1~24小时。
3、检测570nm和600nm的吸光度，或者用荧光微孔板读数530nm激发，590nm发射波读数。
4、如果采用比色法检测，选择OD570-OD600检测，如果检测荧光信号，请在校正OD值后，先设置标准曲线，选择合适您实验的细胞最佳浓度。
操作步骤
1、96孔板饲养细胞至所需浓度。
2、根据您的实验加药刺激，培养细胞一段时间。
3、加入10μL AlamaBlue溶液至培养基中，37度孵育1~24h。
4、检测570nm和600nm的吸光度，或者用荧光微孔板读数530nm激发，590nm发射波读数。
5、如果采用比色法检测，选择OD570-OD600检测，如果检测荧光信号，请在校正OD值后，先设置标准曲线，选择合适您实验的细胞最佳浓度。


结果计算
1、荧光读数法
对于细胞增殖或细胞毒性的检测，待测化合物的活性可计算为细胞数量的变化百分比，计算方法如下：
细胞活性(%) = 100 X (FCMPD - FO) / (FCTRL - FO)
FCMPD和FCTRL分别是加入和未加入待测化合物时的平均荧光强度，FO是空白对照品的平均荧光强度。
对于剂量反应研究，可绘制检测数据与化合物浓度的曲线。也可采用PRISM或其他数据分析工具通过非线性回归分析确定EC50（细胞增殖检测）和IC50（细胞毒性检测）。

2、吸光度算法（还原率%）
校正系数Ro=Ao570/Ao600
设置对照，空培养基加Alamar Blue液对照。
还原率AR570（%）=[A570-(A600×Ro)]×100
A570与A600是指所有样本组的吸光度分别减去空培养基组的空对照Ao570和Ao600 。