Transwell 细胞迁移/侵袭实验

价格： ￥400

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服务名称：细胞迁移/侵袭实验

提供商：天津赛尔生物

Transwell 细胞迁移/侵袭实验
技术简介
Transwell小室利用经过处理的具有孔径的聚碳酸酯膜，接种于上室内的细胞通过下室诱导因素的刺激可通过滤膜进入下室，被用来进行细胞共培养、细胞趋化、细胞迁移以及细胞侵袭等科学研究。

实验步骤：
1. 小心取出Transwell小室，将小室架在24孔板上。
2. 消化处理后的细胞并计数，取10⁵个细胞置于1.5mlEP管中，2000rpm离心5分钟，去上清，加入200μl无血清培养基重悬细胞，加入Transwell小室中。下层小室加入30%FBS的完全培养基。放入 37℃孵箱中培养数个小时。
3. 染色：
① 取出小室, 用棉签擦除里面的细胞，并用PBS（用600微升放在另一个孔中）轻轻洗掉小室里面剩余细胞，然后取出小室放纸上把多余的水吸净。
② 取出Transwell小室，用棉签擦除里面的细胞，并用PBS轻轻洗掉里面剩余细胞。用配制成的混合液，固定Transwell小室反面的细胞10分钟。
③ 用结晶紫染色剂染色并固定15分钟。
④ 自来水轻轻涮洗小室,3－5次即可。
⑤ 用滤纸吸干小室里残留的水，放在通风橱中风干1分钟。
⑥ 手术刀片，小心沿小室边缘将膜剔下，反面朝上放在载玻片上。立即滴二甲苯约15µl于膜上，倾斜载玻片，用滤纸吸走多余的二甲苯。滴中性树胶约15µl于膜上，加盖玻片，排除气泡。
4. 显微镜下将每张膜随机取5个视野进行拍照，随后观察计数，平均值即为该膜一个视野所通过膜的细胞数平均值。

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