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文献和实验
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保质期 :见产品外包装
英文名 :Reverse Transcriptase Assay, colorimetric
库存 :需确认
供应商 :嵘崴达
CAS号 :见产品外包装
保存条件 :−20°C
规格 :200 tests
逆转录酶检测,比色法
suitable for enzyme immunoassay, kit of 1 (14 components), sufficient for ≤200 tests
别名:RT-PCR
一般描述
比色酶免疫测定法,可用于通过将di高辛和生物素标记的dUTP掺入DNA中来定量测定逆转录病毒的逆转录酶活性。应用
逆转录酶检测法设计用于定量测定细胞培养物和其他生物样品中的RT活性。该检测方法可用于确定逆转录病毒在培养中的哺乳动物细胞(经逆转录病毒感染的)中的增殖。该检测也可用于RT抑制剂的体外筛选。包装
1个试剂盒包含14种组分。产品规格
逆转录酶(RT)活性的测定已广泛应用于逆转录病毒繁殖的体外测试。早期原病毒DNA的合成需要RT,因此其是抗逆转录病毒治疗的主要靶标(例如在获得性免疫缺陷综合症(AIDS)中)。逆转录酶通常使用与各种引物复合的RNA作为DNA合成的模板。为了检测或定量RT活性,传统上通常对掺入的放射性标记核苷酸进行定量。检测时间:大约4小时(对于1小时的酶反应来说),大约18小时(对于15小时的酶反应来说)。
样品材料:细胞培养上清液和其他生物样品、RT抑制剂。
灵敏度:逆转录酶检测可在1小时反应中检测到20pg HIV-1逆转录酶。可以在过夜反应中检测到1pg。
该检测方法可检测天然或重组逆转录病毒的逆转录酶活性,包括HIV-1、HIV-2、SIV-1、AMV和M-MulV的活性。
原理
逆转录酶检测,比色法,利用逆转录酶合成DNA的能力[使用杂合poly(A)x oligo(dT)15作为模板和引物]。其可避免使用标准RT测定中所使用的[3H]-或[32P]-标记的核苷酸。代替放射性标记的核苷酸,以优化的比例将di高辛和生物素标记的核苷酸通过RT活性掺入相同的DNA分子中。试剂盒中提供有模板/引物杂交体,但是由于检测的灵活性,其允许使用自选的模板(例如病毒模板)。以合成的DNA作为RT活性参数,根据夹心ELISA实验方案对DNA进行检测和定量:生物素标记的DNA结合至链霉亲和素包被的微孔板模块的表面。在下一步中,加入与过氧化物酶缀合的di高辛抗体(抗-DIG-POD),并与di高辛标记的核苷酸进行结合(经Institute Pasteur许可)。最后,加入过氧化物酶底物ABTS。过氧化物酶可催化底物的裂解以产生有色反应产物。使用微孔板(ELISA)读数器对样品的吸光度进行测定,其与样品中的RT活性水平直接相关。11468120910 | Rev. Transcriptase Assay,Non-r | 1 kit (200 tests) |
11989685001 | StreptaWell, HB (transp. 96-we | 15 plates (96 wells) |
11815016001 | Anti-HA Affinity Matrix抗HA亲和力矩阵 | 1 ml (settled resin volume) |
11089153001 | Streptavidin-POD链霉亲和素-过氧化物酶 | 500 U |
11365177001 | N-Glycosidase F, 250 uN-糖苷酶F | 250 U (0.25 ml) |
11693417001 | EPO Elisa促红细胞生成素 | 1 kit (96 tests) |
3708152001 | Streptavidin Mutein Matrix链霉抗生物素蛋白基质 | 5 ml matrix (10 ml 50% suspension) |
10103233001 | Carboxypeptidase B羧肽酶B | 5 mg (1 ml) |
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