iTRAQ/SILAC/SWATH/蛋白表达纯化

服务名称 ： iTRAQ/SILAC/DIGE/蛋白表达纯化

提供商 ： 威斯腾生物

同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ)
iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是由美国应用生物系统公司ABI 研发的一种多肽体外标记技术。iTRAQ 4标 或8标的同位素标记试剂由4种相对分子质量分别为114，115，116和117Da或8种相对分子质量分别为113 ，114 ，115，116，117，118，119 和121Da的报告基团（reporter group），相对分子质量分别为31~24Da的质量平衡基团（balance group）以及一个相同的肽反应标记试剂基 团（peptide reactive group）组成。不同的报告基团分别与相应的平衡基团相配后，相对分子质量均为145，即等量异位标签（isobaric tag）。


技术优势：
同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析；
不会破坏所测定的蛋白质；
适合样品类型多：胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等；
与凝胶分离的蛋白质定量技术相比，iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子，如低丰度蛋白质、强酸（碱）性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子；高通量，可一次实验，实现多个样品的蛋白质定性定量；
标记完全，标记效率高达97%以上；
几乎兼容所有来源的样本；
定量敏感，反应速度快，实验周期短。
样本要求：
动物组织：黄豆粒大小，—80℃冰箱或者液氮保存，干冰运输；
细胞样本：细胞量大于10的7次方，—80℃冰箱或者液氮保存，干冰运输。
结果提供：
样本质质检报告；
实验原理、操作流程、试剂耗材、结果说明；
提供标准生物学分析。

SILAC标记定量蛋白质组学
SILAC 的是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经 5-6 个倍增周期后，稳定同位素的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定。
技术优势
· 该技术属于体内标记，标记效果稳定，细胞在传代6-8代之后，蛋白标记效率可达90%以上。其标记效率不受裂解液的影响，不仅适合与进行全细胞蛋白的分析，还适合膜蛋白的鉴定与定量。
· 标记是在样本处理前引入，随后进行蛋白质分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响一致，故样品处理所带来的定量误差会很低。在检测极低水平的蛋白变化或翻译后修饰时，这一点特别有用。
· SILAC灵敏度高，样本量要求少，通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。
· 采用质谱定量，定量结果准确且批次变异小，重复性好。
· 体内代谢标记与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合，兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白，不受蛋白质限制。

SWATH技术检测
SWATH（Sequential Window Acquisition of all Theoretical fragment ions）是瑞士苏黎世联邦理工学院的 Ruedi Aebersold 博士及其团队与 AB-SCIEX 于 2012 年联合推出的一项全新的质谱采集模式技术。SWATH技术具有灵敏度高，重现性强，准确度高，高通量，线性动态范围大等优点。传统的质谱数据采集方式为数据依赖型（Data-dependent acquisition，DDA）采集方式也叫做 Shot-gun 法，在一级质谱扫描中，根据母离子的强度高低来选择母离子进行串联质谱的扫描，得到二级谱图在蛋白数据库进行搜索。这种扫描方式会丢失大量有用的谱图，同时重复性较差。
SWATH 采集模式是一种新型的 MS/MS 扫描技术，属于数据非依赖型采集方式（Data-independent acquisition，DIA）。DIA按照设定的方法，将所有的母离子都进行串联质谱扫描。SWATH 根据酶解肽段的质荷比和洗脱时间来设计采集二级谱图的离子窗口。以扫描范围 400～1200 为例，m/z 25 作为一个扫描间隔（SWATH），每个 SWATH 扫描时间设定为100ms，那么该扫描范围累计需要 32个扫描窗口，完成一次扫描仅需要 3.2秒。
SWATH流程图如图所示，分为以下几个步骤：
1）蛋白质的提取，酶解和纯化。
2）酶解后的肽段进行 shotgun检测，用 proteinpilot进行数据库检索，得到蛋白定性
3）根据 shotgun 的检测结果，确定 SWATH 的扫描间隔等质谱参数，进行样本的 SWATH检测，每个样本重复检测3次。
4） 用shotgun 的检索结果建立离子谱图库，SWATH样本检测到的谱图信息使用Peakview在离子库中进行蛋白的匹配和定量信息的提取。
5）将Peakview导出的蛋白结果导入到 Makerview进行数据处理，得到蛋白定量结果。 蛋白表达纯化
随着蛋白药物市场的快速发展和蛋白质组学研究的深入，高纯度活性蛋白的需求越来越大。威斯腾生物中心组建了一支由多名具深厚生物技术基础与制药企业工作经验的留学归国人员和国内专家为核心的团队。可为国内外客户提供从基因到蛋白纯化的整套技术服务。
威斯腾服务特色
稳定而多样的表达系统：威斯腾生物已建立整套的基因克隆与表达体系，无论是单个基因的克隆、表达与纯化，还是多个基因高通量的基因克隆、表达和纯化，均能选用适合您试验（科研项目）需要的表达系统和合适的表达载体为您提供优质的服务。
多种纯化方式：可为客户提供多种蛋白纯化服务，纯化方式包括亲和层析纯化、凝胶过滤、离子交换、疏水层析等，客户可根据需要选择合适的纯化方式。
专业的团队和良好的信息管理体系：专业的基因克隆、蛋白表达与纯化技术人员与团队，具有丰富的表达和纯化经验，可为客户解决各种瓶颈问题, 良好信息管理体系使我们能够为客户提供成熟、高效的基因克隆服务。
操作流程
大肠杆菌和酵母蛋白表达系统：
合成基因（另外收费）或者客户提供
SDS-PAGE检测表达
Western blot检测表达（可选）模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)
构建表达载体
筛选阳性克隆
表达优化和可溶性分析
提供结果
１、构建的表达载体及测序报告
２、SDS-PAGE结果
３、筛选的表达菌株
４、Western blot结果
５、实验流程及结果
６、2ml 1.0×108pfu/ml的病毒（利用昆虫杆状病毒蛋白表达系统表达时）
稳定表达细胞株（哺乳动物细胞）

实验服务流程

威斯腾生物服务项目

分子生物学类	蛋白质与免疫学	动物实验
实时荧光定量PCR	单克隆抗体制备	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗体制备	抑郁症动物模型
ELISA（酶联免疫吸附法）技术	Western-blot 实验服务	脊髓损伤模型
生化指标检测	蛋白双向电泳实验服务	脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测	原核蛋白表达纯化	骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表达纯化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白质组学	心力衰竭模型
	SLAC蛋白组学	肺动脉高血压动物模型
		高血压模型
病毒类	实验课题整体外包	粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化	整体课题外包	大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化	细胞整体实验外包	慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化	动物整体实验外包	过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代细胞培养	肝纤维化模型
细胞因子芯片	骨髓间充质干细胞培养	胆结石模型
生长因子芯片	脂肪干细胞培养	急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片	心肌成纤维细胞培养	急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片	软骨细胞培养	体内血栓模型
生长因子芯片	血管内皮细胞培养	关节炎模型
炎症因子芯片	神经元细胞培养	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	内皮组细胞原代培养	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因编辑动物
趋化因子芯片	电生理相关服务	动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片	膜片钳实验
细胞生物学	高通量测序	代谢组学
细胞原代培养	mRNA测序	气相色谱GC/MS
MTT检测	LncRNA测序	液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测	全基因组测序	核磁共震NMR
细胞周期检测	RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验	外显子测序	影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭	16s扩增子测序	Micro-CT
流式分选	Small RNA测序	小动物活体成像
CCK8/XTT检测	宏基因组测序	核磁共振
台盼蓝检测细胞活性	单细胞测序	PET-CT
药物筛选细胞学实验	circleRNA测序
细胞粘附性检测	甲基化测序	基因编辑动物
细胞划痕实验		条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验		全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理类	CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入	基因芯片
扫描电镜	基因定点突变细胞系	LncRNA芯片
透射电镜	单基因敲除细胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除细胞系	mRNA芯片
免疫组化	目的基因敲入细胞系	甲基化芯片（限人和小鼠来源样本）
Tunel（原位末端凋亡法）检测	报告基因敲入细胞系	SNP芯片（限人和小鼠来源样本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色	CRISPR/Cas9动物敲除/敲入	科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交	基因敲除大鼠/小鼠	科研文献论著翻译
荧光原位杂交	基因敲入大鼠/小鼠	SCI论文翻译润色服务
特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等）		临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测	药物筛选服务项目	药效学评价
水迷宫实验	高通量自动药物筛选平台	神经系统药物药效学评价
旷场实验	细胞高内涵药物筛选平台	抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测	蛋白质组学靶标研发平台	心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测	分子药理研究平台	泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳	生物膜片钳药物筛选平台	内分泌系统药物药效学评价
	常规药物体外筛选	抗炎免疫药物药效学评价

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！