尼龙棉柱的制备？T细胞的分离技术和试剂的探讨

尼龙棉柱的制备：将长12-16厘米，内径5-6毫米，壁厚0.2毫米的塑料软管的一端用烘热的钳子钳压成45-55的斜角。称取50mg左右的尼龙棉，用0.2mol/l盐酸浸泡过夜，以大量蒸馏水漂洗晾干。然后细致撕匀，浸泡在盛有Hanks液的平皿中，以小镊子将尼龙棉填塞于塑料软管中，并用细竹签均匀的将尼龙棉加到管底。尼龙棉柱高度6cm,一般可有效滤过20*106-30*106个细胞。加满Hanks液，勿产生气泡。制好后可冰冻保存，用时取出融化。再将塑料软管斜角尖端剪成1-2mm的小切口，使管中原有的Hanks液流出 ，流速为 30滴/分以上，但水滴不成线为宜。反复冲洗，最后一次以预温至37C，含20%小牛血清的RPMI-1640洗柱。
（2）细胞过柱分离：
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将0.5ml淋巴细胞悬液（细胞浓度为2*106/ml或更高）加入尼龙棉柱内，平放尼龙棉柱，以细长的滴管伸入柱内近尼龙棉界面，滴加0.2ml预温至37C的含20%小牛血清的RPMI-1640封口，以免尼龙棉干后影响淋巴细胞活性。平置于37C温箱中孵育30分。取出，用预温至37C的上述溶液5-10ml洗柱,再用20-25ml上述溶液充分洗去残留的T细胞。洗下的悬液经2000r/min离心10分后，计数细胞并调整至所需浓度，此即分离的纯T细胞。[最后再用上述液体对尼龙棉柱反复冲洗并从上至下轻轻捏挤，直至挤完柱内残留液体，可使黏附的B细胞洗脱，洗下的悬液经离心后，即可得到纯B细胞。此法简便快速，不需特殊仪器，淋巴细胞活性不受影响，T细胞纯度可达90%以上。