MTT 噻唑蓝 298-93-1

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英文名 ：MTT

库存 ：大量

供应商 ：Solarbio

CAS号 ：298-93-1

规格 ：250mg/1g

Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT)
噻唑兰

说明：生化研究中酶活力的测定，也可用于细胞增殖检测。
别名：3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物；
3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2Htetrazolium
bromide；
Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide
分子式：C18H16N5SBr 分子量：414.3
CAS＃：298-93-1
外观：黄色粉末
特性：纯度(%)：>98.0 溶解性：溶于jia醇和DMSO，微溶于水
R：36/37/38; 68 S： 36/37/39
储存条件： 2-8℃ 避光


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实验方法
⒈选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。
⒉药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。
⒊ 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是很好的时间点
⒋培养时间。200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。
⒌MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。
⒍理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。
⒎实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。
⒏避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加，会试验敏感性。因此，一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
MTT 溶液的配制方法
通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器 好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度 好在0-0.7 范围内。
MTT一般现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融， 好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心，有条件带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
配制MTT时用用PBS溶解，也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。
PBS配方：
Nacl 8g
Kcl 0.2g
Na2HPO4 1.44g
KH2PO4 0.24g
调pH 7.4
定容1L
MTT用途及原理
MTT主要有两个用途：
1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；
2．细胞增殖及细胞活性测定。
MTT原理：
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。



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参考文献：
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《具有相同阳离子链段的可生物降解的共聚物及其在siRNA递送中的性能》 作者:若古奇，施刘，杰陈一海啸一bLesan Yan ab黄玉斌黄一 Xiabin 靖一 期刊:控制释放 期刊 影响因子: PMID:
《Simultaneous determination of saikosaponins in Bupleurum Radix from different locations by high performance liquid chromatography- charged aerosol detection (HPLC-CAD) method and its immunomodulation effects on mouse splenocytes》 作者:Lina Wang, Bin Chen, Wei Wang, Nan Xu and Tianzhu Jia* 期刊:academic Journals 影响因子: PMID:
《Ras-association domain family 1 (RASSF1A) gene regulates progression, migration and invasion of bladder cancer》 作者:Yuhai Bao,Xuefeng Liu,Yang Liu,Si Wang,Bin Wu 期刊:Surgical Oncology 影响因子:2.136 PMID:
《Intermedin protects HUVECs from ischemia reperfusion injury via Wnt/β-catenin signaling pathway》 作者:Yanhong Wang, Zhijing Wu, Jihua Tian, Yang Mi, Xiaojun Ren, Jing Kang, Wan Zhang, Xiaoshuang Zhou, Guiqin Wang & Rongshan Li 期刊:Renal Failure 影响因子:1.687 PMID:30931679
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《Curcumin analogues attenuate Aβ25-35-induced oxidative stress in PC12 cells via Keap1/Nrf2/HO-1 signaling pathways》 作者:Jialin Xu，Leilei Zhou，QiWeng，Linxia Xiao，Qingyong Li 期刊:Chemico-Biological Interactions 影响因子:3.407 PMID:30946834
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《Effects of Heat Treatment on the Structural Characteristics and Antitumor Activity of Polysaccharides from Grifola frondosa》 作者:Hai-yu Ji,Pei Chen,Juan Yu,Ying-ying Feng,An-jun Liu 期刊:Applied Biochemistry and Biotechnology 影响因子:2.14 PMID:30536035
《1-Hydroxy-3,7,8-Trimethoxyxanthone Suppresses the Malignant Proliferation of Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Colon Cancer Microenvironment》 作者:Hui-qiao Zhao, Nian-hua Lu, Xu-dong Zhang, Na Liu and Ming Jing 期刊:International Journal of Pharmacology 影响因子:0.754 PMID:
《Andrographolide prevents human nucleus pulposus cells against degeneration by inhibiting the NF‐κB pathway》 作者:Jianwei Liu , Tongmeng Jiang, Mingwei He , Depeng Fang, Chong Shen, Yiguan Le , Maolin He , Jinmin Zhao, Li Zheng 期刊:Journal of cellular physiology 影响因子:4.522 PMID:30370694
《Honokiol inhibits breast cancer cell metastasis by blocking EMT through modulation of Snail/Slug protein translation》 作者:Wen-die Wang, Yue Shang, Yi Li & Shu-zhen Chen 期刊:Acta Pharmacologica Sinica 影响因子:4.01 PMID:31235819
《Effects of nanoparticle size on the interaction between zinc oxide nanoparticles and bovine serum albumin》 作者:Liwei Wang, Tingting Liang, Jun Ma, Liqian Sun, Congcong Yang, Liqiang Meng et al. 期刊:Journal of Biomolecular Structure and Dynamics 影响因子:3.31 PMID:30938584
《NADPH Oxidase Isoforms Are Involved in Glucocorticoid-Induced Preosteoblast Apoptosis》 作者:Shu-Cai Bai,Qian Xu, Hui Li, Ya-Fei Qin, Li-Cheng Song, Chen-Guang Wang, Wen-Hao Cui, Zhi Zheng,De-Wen Yan,Zhi-Jun Li, Dong Li, Xin Wan,and Hua-Feng Zhang 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影响因子:4.868 PMID:31049140
《Activation of the p38/MAPK pathway regulates autophagy in response to the CYPOR-dependent oxidative stress induced by zearalenone in porcine intestinal epithelial cells》 作者:Tongtong Shen,Yufan Miao,Chenchen Ding,Wentao Fan,Shuhui Liu,Yanan Lv,Xiaona Gao,MartheDe Boevre,Liping Yan,Sheila Okoth,Sarah De Saeger,Suquan Song 期刊:Food and Chemical Toxicology 影响因子:3.775 PMID:31173817