DsDD cDNA Subtraction Kit Wako双链特异性直接消化cDNA削减试剂盒

库存 ：少量现货

供应商 ：上海甄准生物科技有限公司

规格 ：5次用

DsDD cDNA Subtraction Kit Wako双链特异性直接消化cDNA削减试剂盒
Simple and quick enrichment of specifically expressed genes
TIBCO削减法杂交法是一种利用组织特异性显现，鉴定基因的有效方法之一。迄今为止有各种各样不同的方法被提出，然而，无论哪种方法的操作都较为烦杂且作业工序多，需要时间和高技术。而且，cDNA Library 不能用于作为启发材料，因而每次都不得不用mRNA准备Tester及Driver cDNA。
DsDD（Duplex-specific Direct Digestion）cDNA Subtraction Kit Wako 是以cDNA library 的调制为基础，运用减去法调制Tester 及Driver cDNA。再利用Tester及cDNA 显现组织的非特异性，形成高品质的基因同伴。在二条链的特异性DNA核酸酶存在的情况下，利用Duplex-specific nuclease,分解杂化的DNA。之后，利用ExonucleaseⅠ 分解除去在Tester cDNA中特异显现的残留Drive cDNA，以实现cDNA高效浓缩。
在解析癌细胞组织特异性机能和性质时，Tester cDNA 由癌细胞组织调制，Driver cDNA由正常细胞组织调制，浓缩来自基因的cDNA，可显现癌细胞组织的特异性。DsDD cDNA Subtraction Kit 中的cDNA Library 可用于作为起动材料，此方法的全部工序可在2天完成，是划时代的技术。
【试剂盒内容】

●　Lambda Exonuclease	5?l X 1支
●　10 X Lambda Exonuclease Buffer	25?l X 1支
●　4 X Hybridization Buffer	25?l X 1支
●　Duplex—specific nuclease	5?l X 1支
●　2 X Duplex-specific nuclease Buffer	25?l X 1支
●　ExonucleaseⅠ	5?l X 1支
●　10 X Exonuclease I Buffer	25?l X 1支
●　Ethachinmate	50?l X 1支
●　Stop Solution	50?l X 1支
●　3mol/Sodium Acetate, PH5.2	200?l X 1支
●　使用手册	1本

【试剂盒原理】
注意Tester cDNA Library及Driver cDNA Library。
对于cDNA媒介物，Tester使用同一方向插入的cDNA Library。
1. Tester Library（异常）→DNA放大 →由Library 放大的Tester dsDNA.
Driver Library（正常）→DNA放大 →由Library 放大的Diver dsDNA.
2. Tester DNA的调制：
使用仅一侧磷酸化的cDNA程序库，用启发剂进行DNA放大，经Lambda Exonuclease 处理，调制出1条链cDNA。
注1） Tester cDNA放大。
DNA放大时，对附带磷酸的5ˊ末端使用启发剂。
注2） Lambda Exonuclease 处理。

识别2条链DNA的5ˊ磷酸末端，由5ˊ→3ˊ方向分解。如果无法形成高品质的Tester同伴，可适当提高减去法效率。
3. Driver DNA的调制：
使用cDNA程序库进行DNA放大，将multi-Croning两侧的部分部位用限制酶处理。
注3）制限酶处理：
除去两端的接合部分，以防止杂交时的差错及杂化。
4. 杂交：
Tester cDNA和Driver cDNA在68℃情况下反应16--20小时。(混合比为1：200)过量的Driver cDNA与除特异性基因以外的Tester cDNA大部分形成dsDNA。
注4）热变性后，Tester ss cDNA 和Driver ds cDNA不进行杂交。
5. DSN处理：
利用DSN作用于2条链的特异性，分解除去杂化形成的2条链cDNA。
注5）进行高特异性反应，其反应温度高于68℃。
6. DNA放大
7. Exonuclease I 处理
利用Exonuclease I 分解除去未形成杂化的残留Driver ss cDNA。使用酶切断特异性1条链DNA。除特异性基因以外的一条链状态全部分解。自实验开始起2天内，即可得到高效率的Subtracted cDNA。

产品编号	品名	容量
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