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文献和实验
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服务名称 ：蛋白质从头测序及N,C端测序
提供商 ：西农生（北京）生物技术有限公司
1.N端测序
服务内容 艾德曼法
本公司可开展蛋白质的N-端氨基酸序列测定工作：一次可以连续测定30个以上氨基酸
样品要求
1.含量：建议送样量不低于 50pmol
2.状态：液体、冻干粉或PVDF转膜样品均可
3.纯度：建议95%以上纯度
4.性质：注明其溶解性，挥发性，毒性/腐蚀性等
5.信息：表观分子量；修饰信息；样品组织来源及制备方法信息
6.其它：A. N端未封闭
B.缓冲液中不要包含氨基酸成分,如甘氨酸
C.不含干扰物质
D.样品需要转膜制备时,建议将样品交由我们代为处理，并同时提供相应的电泳方法与带有mark的电泳照片
E. 样品如有特殊理化性质（如膜蛋白，特殊酶活性，特殊结构等），请详细说明
F. 若为已知序列样品，请告知预期序列信息
2.蛋白denovo测序：
适用于多氨基酸残基（如几百个以上）的多肽及蛋白测全长，
酶切加质谱,软件分析
酶：Trypsin、Chymotrypsin、Glu-C、Lys-C、ASP-N
抗体和重组蛋白全长测序常见问题
1，测序需要多少量抗体？
(1) 蛋白从头测序标准的送样量是 100ug，纯度是 90%以上。
(2) 有最低 20ug 测序成功的经验。蛋白纯度对测序结果的影响较大，杂的抗体蛋白、
同源蛋白及 BSA 等会对样品测序产生干扰，从而影响实验结果。
(3) 蛋白溶解缓冲液标准的送样建议是使用 PBS 或 Tris 缓冲液体系，此外如果有甘油、
BSA、去垢剂、盐等成分，我们会有相应的方法做一些纯化处理，所以是不影响测
序结果的。
2，测序是单抗还是多抗？
(1) 单抗，重组蛋白。
(2) 蛋白从头测序和蛋白的大小长度无关，单抗、Fab/Fc、纳米抗体、重组蛋白、多肽、
荧光标记抗体（如流式抗体 FITC、Cyc5、PE 等标记的抗体）、交联抗体（蛋白交
联在 Beads 上）等均可以进行从头测序。
(3) 样品糖基化和翻译后修饰不会影响测序：数据分析时会将可能的翻译后修饰和糖基
化修饰考虑在内，不影响样品本身测序结果。
3，测序的周期是多长？
(1) 符合送样要求，从开始检测到报告发送标准的服务周期是 14 个工作日。
(2) 符合送样要求，可加急，做到 14 个自然日。
(3) 顺利的话，某些项目可加急做到 7 个工作日（9 个自然日）
4，测序的结果怎么提供？
（1）邮件发送结果
（2）完整报告内容包括但不限于以下信息
①完整的蛋白氨基酸序列，抗体包括重链和轻链序列，恒定区和可变区。
②完整分子量验证信息，将实际测得的分子量与理论序列分子量进行比对来验证序列
的准确性（偶联到 beads 上的抗体不提供抗体完整分子量信息）。
③完整序列的肽段覆盖图，每个位点的氨基酸有超过 3 种不同的肽段支持。
④抗体可变区肽段的二级质谱图支撑。
⑤I/L 鉴定的可信度分析。
5，测序的准确性如何？
(1) 测序结果保证全序列覆盖和 100%序列准确，每个位点的氨基酸有超过 3 种不同的
肽段支持，每个氨基酸在质谱图里有强的碎片离子峰证据。测序结果结合软件算法
和人工检验，双重保证序列准确性。
(2) 针对于单抗，有一个区别于经典款的保活款单抗测序项目（保活款与经典款测序流
程一致，区别只在于价格和风险承担方式，一般不建议）：
1
交付 3 毫克重组抗体。客户测试亲和性成功以后交付轻重链全长序列以及报告，
价格比全长测序服务增加 1.0 万元，周期增加 20 工作日；
2
客户检测没有活性，不收取费用、不交付轻重链全长序列和报告；
西农生（北京）生物技术有限公司
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