产品详情
文献和实验
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规格 :100 Rxns×20μl
产品简介
EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS III提供了一种简单快速的方法,无需RNA分离即可从培养细胞中获得cDNA。本产品得到的cDNA可在-80°C储存长达3个月且Ct值无明显变化,可很好的替代TRIzol法进行基因表达定量分析。与TRIzol法相比,本产品具有简单快速、稳定性高和灵敏度强等特点,从培养细胞到cDNA最快仅需25 min,最低检测下限为1000个细胞。
产品组分
组分 |
B0015-S (10 Rxns, 20μl/Rxn) |
B0015 (100 Rxns, 20μl/Rxn) |
Cell Lysis Buffer |
1.1 ml × 2 |
5.5 ml × 4 |
gDNA Remover |
24 μl |
240 μl |
4× CC RT Mix |
55 μl |
550 μl |
ddH2O (Nuclease-) |
1 ml |
1 ml × 2 |
保存条件
本产品的所有组分建议置于-20°C保存。过期日期详见产品标签中有效期信息。
产品特点
1. 简单快速:只有2步(细胞裂解、逆转录),仅需25分钟左右即可得到cDNA。
2. 基因组残留少:试剂盒中配有1管gDNA Remover试剂,室温处理5分钟,即可有效去除95%以上的残留基因组DNA。
3. 所需样品少:最低可提取5000个细胞的RNA(对于更少的细胞数建议用B0011这个试剂盒),一般细胞数是5000 ~ 50万个细胞。
4. 节约成本:试剂盒所需的细胞数较少,所以大大节省血清和药物等试剂。
5. 安全无毒:不使用苯酚、氯仿、异丙醇、DEPC水等对身体有害的物质。
自备材料
水平摇床(可选)、RNase-free PCR管或八连管、RNase-free枪头和PCR仪等。
注意事项
1. 建议优先使用24孔板培养细胞,48或96孔板亦可,否则需要用胰酶消化后收集到离心管管中进行裂解;对于悬浮细胞,需要离心去除培养基,用PBS重悬后取一定数量的细胞转移到无酶离心管中,离心去除PBS后再加入裂解液裂解。
2. 细胞密度:对于24孔板培养的细胞,建议收细胞时细胞密度达到50%~100%为佳(约20万~40万),30万~40万左右最好,以使所加裂解液能完全覆盖孔底。可参考细胞密度与裂解液添加量参考表。
3. 细胞从培养箱中取出后建议放在室温,切勿放在冰上,以免影响细胞状态。
4. 初次使用建议至少多养一个孔,以便在使用本试剂盒做实验时对细胞进行计数,之后可参考估数图进行估数。
5. 所有试剂使用前须混匀。本试剂安全无毒,建议在开放环境进行实验即可;如果在通风橱内操作,建议不要开风机,以免吹干细胞导致RNA严重降解。
6. 对于一些细胞体积与常见细胞(比如293T细胞)的体积差异极大的细胞种类,建议进行预实验,确定一个合适的裂解液比例后再进行正式实验。
7. 建议实验开始前,先解冻Cell Lysis Buffer,解冻后需颠倒几次使之充分混匀,然后放在室温备用,请勿涡旋振荡。
8. 为了您的安全和健康,请穿戴实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、使用RNase-free耗材,避免RNase污染。
细胞密度与裂解液添加量参考表
培养板 |
24孔板 |
96孔板 |
|||||||
细胞密度 |
20~30% |
35~45% |
55~65% |
80~100% |
10~15% |
30~45% |
60~80% |
90~100% |
|
细胞数 |
~10万 |
~20万 |
~30万 |
~40万 |
~50万 |
~2万 |
~5万 |
~10万 |
~15万 |
裂解液(μl) |
80 |
100 |
150 |
200 |
200 |
16 |
40 |
50 |
75 |
裂解液用量比例 |
80 μl /10万细胞 |
40 μl~50 μl /10万细胞 |
80 μl /10万细胞 |
50 μl /10万细胞 |
代表性实验结果
由上图可见,EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS III得到的cDNA的qPCR结果与TRIzol方法高度一致。
相关详细信息,请查看产品说明书。
上海海方生物技术有限公司
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