蛋白质体外结合实验（GST pull-down 技术）

 

 

▼服务简介

 

  蛋白互作在细胞生命活动中起着关键作用, 在不同时空层面上参与多种细胞过程, 因此研究蛋白互作对于理解分子调控网络至关重要。通常情况下, 利用酵母双杂交系统筛选植物蛋白互作必须利用体外和体内系统进行验证。Pull-down就是验证植物蛋白互作的常用技术，被广泛用于体外验证蛋白间的直接互作。

 

▼应用场景

    

  Pull-down 技术, 也叫蛋白质体外结合实验, 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。

 

▼实验原理

 

  将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的珠子上, 作为与目的蛋白亲和的支撑物, 充当“诱饵蛋白”, 目的蛋白溶液与之孵育, 可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白), 洗脱结合物后通过 SDS-PAGE 电泳分析, 从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白, 诱饵蛋白和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。在Pull-down 实验中, 设计恰当的对照实验非常重要, 该对照可以是表达有GST (非诱饵融合蛋白)的转化细胞裂解物, 也可以是将 GST 加到非转化细胞的裂解物中。 GST 融合蛋白 Pull-down 的方法可以用来鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质, 也可以鉴定2个已知蛋白质之间是否存在相互作用。此方法简单易行, 操作方便。但Pull-down 的结果并不能真实的反应蛋白质之间的相互作用, 因为在活体内它们不一定在亚细胞空间上能碰到, 所以并不意味着在生理条件下一定结合。

 

▼服务内容

 

    

 

▼我们的优势

 

1. 表达蛋白时有独家改造的适合不同蛋白表达的标签载体，确保表达出可溶性蛋白；

2. 原核表达对培养基，温度，ph，时间，分子伴侣等进行优化组合，确保可溶性蛋白产量；

3. 添加各种裂解液和蛋白酶抑制剂的超声破碎缓冲液，确保蛋白产量；

4. 独特的超滤缓冲液配方，保护蛋白且不影响蛋白互作；

5. Sigma原装试抗体和磁珠，保证结合效率；

6. 独家封闭液和洗涤液，降低实验背景。