外泌体NTA鉴定

外泌体的鉴定可以从很多方面展开，今天为大家介绍一些常用的鉴定方法，供大家参考。

1 TEM/SEM 透射电镜/扫描电镜检测

双层囊膜结构是外泌体重要标志之一，但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。而透射电子显微镜 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可达0.1 ~ 0.2 nm，可将被观察物体放大至数百万倍，非常适合进行外泌体双层囊膜超微结构观测。

2 NTA纳米颗粒跟踪分析

纳米颗粒跟踪分析技术（简称：NTA），是近年来新兴的纳米级别测量技术之一，原理如下图所示。纳米颗粒在其悬浊液中受到周边溶液分子的撞击而做无规则的布朗运动，然后通过斯托克斯-爱因斯坦方程，这些颗粒在单位时间内 (ts) 的移动速度（2,y>）与其本身的粒度（dh）、溶液的粘度（Ƞ）和温度（T）存在数量上的关系。因此通过观察溶液中的颗粒运动轨迹，得出与之相关的颗粒粒径数据。同时，通过仪器内置的高速相机和软件，对观察到的每一个颗粒进行跟踪分析，最终提供与常规粒度仪所不同的粒径数量分布以及颗粒物浓度的分析结果。通过纳米颗粒示踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,即 NTA)技术， 可以对10-2000nm范围内的纳米颗粒进行快速实时动态检测，测量 参数包括颗粒粒径、散射光强、浓度等，可对抽提获得的外泌体进行粒 径大小及数量进行统计，以及初步质量评估。该技术易用、快速、稳健、 准确,是对现有外泌体鉴定方法的一个良好补充。

3 WB电泳

通过特有外泌体标志物的 Western Blot鉴定说明样本为外泌体。WB鉴定外泌体常见marker：CD63/ CD81/ CD9/ TGS101/ HSP70 等

4 外泌体示踪

外泌体是细胞分泌的微小膜泡，具有双层膜结构。PKH67荧光染料可以稳定的与膜脂质区结合并发出绿色荧光。PKH67荧光染料标记外泌体之后，与受体细胞共培养，进而可以示踪细胞摄取外泌体。

 

蛋白质印迹法（WB）：

WB是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，它是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，然后分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

流式细胞术（FCM）是对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选

此外还有动态光散射（DLS）、AFM: Atomic force microscopy原子力显微镜、流式细胞术等一些鉴定方法，大家可以选择几种方法组合检测来表征自己的外泌体。